Способ определения 1,5-диаминоантрахинона в крови лабораторных животных Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

ю

СП

СП

ел

H3o6peTetme относится к медиБ41нс- ким токсикологическим исследованиям, в частности санитарной токсикологииj и может быть использовано для количественного определения 15,5-диамино- антрахинона в биологических жидкостях например в кровио

Цель изобретения - поньасение чувствительности способа

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определехтася 1дЗ-диаминоантрахинана в биологических жидкосч ях путем добавления к исследуемой пробе экстра гейта с последующим фотометрирова- нием полученного при взаш годействин 1,5-диаминоантрах1 1Нона. с экстраген- том окрашенного, продукта, отличи™ тель ной особенностью является то,, что в качестве экстрагента используют смесь, бензола с xjiOpoii;opMOM в соотношении 4jig что позволяет повысить чувствительность способа до Ojl мг/л. О количестве определяемого вещества судят по величине оптической плотности. При экстрагировании анализируемого вещества образуется красно-коричневьй раствор, которьш затем фотометрируют при длине волны 410 нм и толщине поглощаю- щего слоя 1 см,

Способ осуществляют спедующим образом.

У лабораторного животного (белая крыса весом 150--180 г) отбирают 3 мл крови. Пробу крови центрифуги™ руют в течение 15 ютн на лабораторной центрифуге со скоростью 3000 об/мин. Из пробы отбирают 2 мл сьшоротки крови,, к которой прибавяют 0,5 мл 10%-ного раствора хлористого кальция. Для свертыва.ния и осаждения белков раствор центрифугируют в течение 5 мин со скоростью, 3000 об/1У ин„ К ,2 мл нацоса- дочной 1КИДКОСГИ прибавляют 4 мп бензола и 1 мл хлороформа. Смесь перемешивают и содержимое интенс51в- но встряхивают в течение 10 мин,, Смеси дают отстояться до полного расслоения реагентов и исследуемой робы. Затем бензольно-зшороформен- ный слой сливают в пробирку и-через 15-20 мин после экстрагировани.я .изеряют оптическую штотность окрашеного раствора на спектрофотометре ри длине волны 410-геу и то.1щине оглощающего слоя 1 см о По анапоги-ч0

5

-:

5

ной прописи определяют 1,5-диамино- антрахинон в других биологических жидкостях,,

Пример. Анализируют пробы крови {3 мл) с содержанием 1,5-диа- миноантрахинона 0,0; 0,1; 0,5; 1,0; 3,0; 5,0 мг/л. Пробы крови центрифугируют в течение 15 мин на лабораторной центрифуге ОП„ - 3 со скоростью 3000 об/мин. Из каяодой пробы отбирают по 2 мл сыворотки крови, к которой прибавляют мл 10%-ного раствора хлористого кальция. Для свертывания и осаждения белков раствор центрифугируют в течение 5 мин со скоростью 3000 об/мин, К 2 мп на- садочной жидкости прибавляют 4 мл бензола и 1 шт хлороформа,, Смесь перемешивают и содержимое интенсивно встряхивают в течение 10 мин. Смеси дают отстояться до полного расслоения реагентов и исследуемой пробы. Затем бензольно-хлороформен- ный слой сливают в пробирку и через 15-20 мин после экстрагирования измеряют оптическую плотность окрашенного раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм и толщине поглощающего слоя 1 см.

Результаты определения 1,5-диами- ноантрахинона при граничных запредельных и оптимальных значениях параметров приведены в табл.1. Полученные данные свидетельствуют о том, что оптимальный эффект наблюдается при использовании в качестве реагентов смеси бензола и хлороформа в соотношении 4;1.

Сравнительные данные определения 1,5-диаминоантрахинона по известному и предлагаемому способам представлены в табл.2.

Как видно из табл.2, предлагаемый способ определения 1,5-диаминоантрахинона является более чувствительным,, чем известный способ.

Формула изобретения

Способ определения 155-диамино- антрахинона в крови лабораторных 58ИВОТНЫХ5 включающий получение сыворотки кровиэ удаление белков, экстракцию органическим растворителем с последующей спектрофотометри- ей полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью поБЫше,иия чувствительности способа.

экстракцию проводят смесью бензол- хлороформ, взятых в объемном соотношении 4:1, полученный экстракт

1425545

отстаивают не менее 15 мин, после чего спектрофотометрир:тот при длине волны 410 нм.

Т а б л и ц а 1

Продолжение табл.

Изобретение относится к медицине . Из сьшоротки крови удаляют белки и экстрагируют смесью бензол- хлороформ (4:1). Экстракт отстаивают и спектрофотометрируют при длине волны 410 нм и толщине поглощаемого слоя 1 см. Изобретение повьппает чувствительность способа до 0,1мг/Л. 2 табл.

Таблица