Способ моделирования эпилепсии Советский патент 1988 года по МПК G09B23/28 

4

4ib

4:

00

t43

Изобретение относится к экспери- ментальной медицине и может быть ис- пользовано для изучения патофизиологических механизмов развития эпилеп- , тического синдрома.

Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.

Способ осуществляется следующим образом,10

Крысам в течение 3 недель ежедневно однократно вводят субконвульсивную дозу коразола (25-30 мг/кг),При этом отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформиьгх проявлений от 15 единичных миоклонических вздрагиваний отдельных мышц до повторяющихся клонико-тонических судорог с падением животных на бок, вегетативными.расстройствами и постприступной депрес- 20 сией. На этой стадии развития эпилеп- тиформных проявлений животных декапи- тируют, удаляют головной мозг с моз- , жечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при , 25 Замороженную ткань помещают в гомогенизатор, содержащий 1 М уксуснзпо кислоту,нагретую до , гомогенизатор вьщерживают 5 мин в кипящей бане, а затем диспергируют ткань стеклянным зО пестиком 10 мин (9), В некоторых опы-, тех используют экстракцию хлорОформ- метанольной смесью (Ю), Суспензию охлаждают и центрифугируют при 10000 об/мин 15 мин (К-24), Надосадочную жидкость отбирают и доводят рН до 7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют фильтрованием, полученный раствор лиофи- лизируют. Полученные кристаллы аппли- 40 цируют на кору головного мозга экспериментальных животных. Наблюдают развитие в зоне аппликации эпилептических потенциалов типа спайковых разрядов, а также острых волн, 45 Пример, Крысам линии Вис- тар массой 250-300 г в течение 20 дней ежедневно однократно внутри- ; брюптнно вводят коразол в субконвуль сивной дозе (30 мг/кг). Отмечают -п постепенное нарастание тяжести эпи- лептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до пов- . торных генерализованных клонико-тонических судорожных припадков с падением животных на бок вегетативными расстройствами и постприступной депрессией. На этой стадии развития эпи лептиформных проявлений животных де35

55

0

5 0 5 О 0 5 -п

5

5

капитируют, удаляют гол-овной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азбте и хранят при -20 С, Замороженнзт ткань помещают в гомогенизатор, содержащий М уксусную кислоту, нагретую до 90 С,гомогенизатор вьщерживают 5 мин в кипящей бане, а затем диспергируют стеклянным пестиком 10 мин. Суспензию охлаяадают и центрифугируют при 10000 об/мин 15 мин. Надосадочную жидкость отбирают и доводят рН до 7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют льтрованием, полученный раствор лиофилизируют. Полученные кристаллы хранят при -20 С, Кошке весом 2,7 кг под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 2,5 ч после прекращения подачи эфира на переднюю сигмовидную извилину аппли- цируют кристаллы экстракта. Через 5,5 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 500-800 мкВ и частотой 7-10 в секунду, а также острых волн амплитудой 500-700 мкВ, возникающих с частотой 1-4 в секунду, сгруппированных в пачки разрядов длителъностбю 10-15 с,

П р и М е р 2, Крысам линии Вис- тар массой 250-300 г в течение 25 дней ежедневно однократно внутрибрю- шинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (30 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпи- лептиформных проявлений от отдельных миоклоническик вздрагиваний до пов- торнб1Х генерализованных клонико-.то- нических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при -20 С, Замороженную ткань помещают в гомогенизатор, содержащий 1 М уксусную кислоту нагретую до ,гомогенизатор вьщерживапт 5 мин в кипящей бане, а затем диспергируют стеклянным пестиком IО мин. Суспензию охлаждают и центрифугируют при 10000 об/мин }5 мин, Надосадочкую

жидкость отбирают и доводят рН до 7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют.фильтрованием, полученный раствор лиофилизиру- ют. Полученные кристаллы хранят при -20°С, Крысе массой 290 грамм под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 3,0 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозг аПплицируют кристаллы экстракта, Че- .рез 6,0 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 400-900 мкВ и частотой 7-10 в секунду, а также острых волн амплитудой 400-600 мкВ, возникающих с частотой 2-3 в секунду, сгруппированных в пачки разрядов длитель- ностью 10-20 с.

П р и м е р 3, Крысам линии Виста массой 250-300 г в течение 20 дней ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (25 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от отдельных миоклоничес- ких вздрагиваний до повторш;1х генера лизояанных клонико-тонических судорожных припадков с падением животны на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией. На этой стадии развития зпилептиформных проялений животных декапитирзпот, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, а затем готовят экстракт. Полченные кристаллы хранят при -20 С,Кр лику массой 2,37 кг под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозгово оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 2,5 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга аштлициру- ют кристаллы экстракта. Через 6,5 мин ;в эоне аппликации отмеча- ется появление спайковых разрядов амплитудой мкВ и частотой 8-11 в секунду, а также острых волн амплитудой 500-650 мкВ, возникающих с частотой 2-5 в секунду, сгруппи- рованных в пачки разрядов длительностью от 5-10 до 20-30 с.

П р и м е р 4, Крысам линии Вис- тар массой 250-300 г в течение 25 дней ежедневно однократно внутрибрю- шинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (25 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-то- нических судорожных приступов с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при , приготавливают экстракт. Морской свинке массой 280 г под эфирным наркозом проводят трахеотомию,трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 3,0 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга ап- плицируют кристаллы экстракта. Через 5,0 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 400-800 мкВ и частотой 6 - 10 в секунду, а также острых волн амплитудой 400-600 мкВ, возникающих с частотой 1-5 в секунду, сгруппированных в пачки разрядов дпитель- ностью 10-20 с.

Предлагаемый способ позволяет воспроизводить модель эпилепсии в 100% экспериментов, тогда как прототип только в 10-40%.

Формула изобретения

Способ моделирования эпилепсии путем воздействия веществами пептидной природы на головной мозг экспериментальных животных, отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, rpjmne животных дополнительно ежедневно в течение 20-23 дней однократно вводят коразол в субконвульсивной дозе, затем из мозга этих животных выделяют пептидную фракцию и производят аппликацию этого вещест- ва на кору головного мозга экспери- ментальных животных.

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа. Животным в течение 20-25 дней ежедневно однократно вводят субконвульсивную дозу коразола. На стадии развития эпилептиформных проявлений удаляют головной мозг у животных и замораживают его. Замороженную ткань помещают в гомогенизатор с уксусной кислотой и вьщерживают в кипящей бане. Ткань диспергируют,Суспензию охлаждают и центрифугируют. Доводят рН надосадочной жидкости до 7,0. Осадок отделяют фильтрованием и полученный раствор лиофилизируют. На кору головного мозга животных ап- плицируют полученные кристаллы.