Штамм бактерий ЕNтеRовастеR cLoacae, используемый в качестве тест-объекта для санитарно-бактериологических исследований Советский патент 1988 года по МПК C12N1/20 C12Q1/02 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к санитарной микробиологии, и может быть использовано для изучения и контроля санитарного режима эпидемиологически важных объектов (продовольственно-пищевых, водоснабжения и др.), выявления источников, путейI и факторов передачи возбудителей бактериальных киюеч- ных инфекций.

Целью изобретения является создание штамма бактерий, обладающего длительной выживаемостью во внешней среде и селективными штаммоспецифи- ческими свойствами, что позволит уп.ростить его выделение, идентификацию и-повысить точность исследования.

Новый штамм Enterobacter cloacae 18, обладающий хромосомной нетранс- миссивной устойчивостью к гексамети- лентетрамину и налидиксовой кислоте и длительной выживаемостью во внешней среде, получают из исходного штамма Enterobacter cloacae, вьиелен ного из кишечника здорового человека путем последовательной селекции на питательных средах с химиопрепарата- ми вначале мутанта, услойчивого к гексаметилентетрамийу, а затем на его основе мутанта, дополнительно устойчивого к налидиксовой кислоте. Штамм Enterobacter cloacae 18 сохраняет видовые свойства исходного штамма Enterobacter cloacae, в т.ч. длительную выживаемость во внеш1ей среде, и приобретает дополнительные селективные штаммоспецифические свойства - хромосомную нетрансмис - сивную устойчивость к гексаметилеи

тетрамину и налидиксовой кислоте.

Штамм Enterobacter cloacae 18 депонирован- в коллекции Государствен- ного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им, Л.А.Тарасевича под номером 174.

Штамм Enterobacter cloacae 18 характеризуется следуюнщми признаками.

Культурально-морфологические признаки. Клетки палочковидные, одиноч- ные, размеры 1-2x0,2-0,3 мкм, грам- отрицательные, не имеют спор И капсул.

На питательном агаре, питательном агаре с налидиксовой кислотой (too мкг/мл) и гексаметилентетра(и- ном (5000 мкг/мл) через 18-24 ч выращивания в аэробных условиях при

5

0

0

5

ЗУС образует колонии диаметром 2- 4 мм, круглые, выпуклые, сочные, с гладкими краями, мутные, светло- -:ерые. На среде Эндо -в тех же ус-- ;1овиях растет в виде колоний диаметром 3-4 мм, бесцветньк, гладких, мутных,

Физиолого-биохимические свойства. Ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу, маннит, р мнозу, ксилозу. Не ферментирует лактозу, инозит. Образует ацетилметилкарбинол (реакция Фогеса-Проскауэра положительная). Не продуцирует индол и сероводород. Мочевину не расщепляет. Не обладает лизиндекарбоксилазой, фенилаланинде- заминазой и триптофандезаминазой, Утилизирует цитрат натрия на среде Симмонса, не утилизирует ацетат нзт рия. Подвижен. Факультативный анаэроб.

Непатогенен для человека.

Выживает во внешней среде на поверхности изделий из полистирола в течение 9 сут, на поверхности изделий из стекла - 10 сут.

Устойчив к гексаметилентетрамину (МИК 15000 мкг/мл) и налщтиксовой кислоте (МИК 700 мкг/мл). Гены-устойчивости к указанным химио-препаратам имеют хромосомную локализацию и -нет- рансмиссивны путем конъюгации. Чувствителен к химиопрепаратамг МИК, мкг/мл левомицетин 4, тетрациклин В, рифампицин 16} стрептомицин 1; кана- мицин 1,

Пример. Использование штаммов Enterobacter cloacae 18 и Esche- richia coli M17-NR для санитарно- бактериологического исследования с целью оцейки состояния санитарного режима в столовой.и выявление факторов передачи возбудителей бактериальных кишечных инфекций.

В мясном цехе столовой наносят ватным тампоном суспензию (1-10 живых микробных тел в 1 мл) бактерий штамма Enterobacter cloacae 18 на поверхность кусков сырого мяса, в овощном цехе наносят ватным тампоном суспензию (З-Ю живых микробных тел в 1 мл) бактерий штамма E.coli М17 NR на сырье неочищенные овощи. Через 4 и 24 ч делают смывы с рук персона- ла столовой, ручек дверей и объектов, подлежащих санитарно-бактериа логическому контролю (чистой, столовой и кухонной посуды, разделочных столов и др.). Тампонами ,со смывами засевают в пробирках косячки со селективной средой для Е. cloacae 18 (питательный агар с гексаметилентет- рамином 5000 мкг/мл и налидиксовой кислотой 100 мкг/мл) и селективной средой для E.coli M17-NR (среда ЭНДО с рифампицином 100 мкг/мл и налидиксовой кислотой 7.0 мкг/мл), Че рез 18-24 ч инкубации при 37°С выявляют и идентифицируют штаммы Е.cloacae 18 и E.coli M17-NR по наличию роста бактерий на косячках селективной питательной среды, соответствующей штамму. Определяют процентное отношение выявленных загрязненных тест-культурами объектов к числу обследоваккы сбъгктоБ, В данном исследован ;и г смывах через 4 ч штамм Е,cloacae 18 вьщеляют с 15% объектов и рук трех работников столовой, штамм E.coli M17,NR - с 20% объектов и рук пяти рабоников столовой. В смывах черех 24 ч штамм Е.сс- li 18 вьщеляют с рук двух работниксп столовой, со стола и разделочных досок для сьфого мяса, ручек двери .мясного цеха, штамм E-.coli ,М17-М не вьвде ляют. Полученные результаты указывают на роль сырого мяса и сырых овощей, как важного фактора передачи кишечной микрофлоры.

Приготовление питательной среды для въщеления и идентификации бактерий Ente.robacter cloacae 18. В 1 л воды вносят 35 г сухого питательного

агара из рыбного гидролизата, кипятят до полного растворения, добавляют 5 г гексаметилентетрамина, 1C мл горячего раствора налидиксовой кислоты (готовят путем растворения

0,5 г невиграмона в 5 мл 1 N раствора NaOH, добавления 45 мл дистиллированной воды и кипячения до полного

растворения), перемешивают, разливают в стерильные чашки Петри или пробирки (по 4-5 мл с последующим скашиванием) . Готовая среда сохраняет цвет исходного питательного агара, пригодна к использованию в течение 7 сут шри хранении от t-4 до . На питательной среде обеспечивается рост только бактерий штамма Е.cloacae 18, рост остальных видов и штаммов бактерий полностью подавляется. Чувствительность питательной среды для штамма Е.cloacae 18.соответствует чувствительности исходного питательного агара.

Еффективность использования штамма Enterobacter cloacae 18 определяется комплексом его свойств: длительностью вь1зкивания во внешней среде, селективной штаммоспецифической устойчивостью к гексаметилентетрами- ну и налидиксовой кислоте, что позволяет упростить исследование и по- высить их точность.

.Формула изобретения Штамм бактерий Enterobacter cloacae ГИСК 174, используемый в качестве тест-объекта для санитарно- , бактериологических исследований.

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Цель изобретения - создание штамма бактерий, обладающего длительной выживаемостью по внешней среде, селективными штам- моспецифическими свойствами, что позволяет упростить его вьщеление, идентификацию и повысить точность исследования. Штамм Е.cloacae депонирован в коллекции ГИСК им.Л.А.Та- расевича под номером 174. Штамм получен путем селекции и характеризуется длительной выживаемостью во внешней среде ,(9-10 сут на поверхности полимеров и стекла) и селективной штаммоспецифической устойчивостью к гексаметилентетрамину (МИК 15000 мкг/мл) и налидиксовой кислоте (МИК 700 мкг/мл), контролируемой хромосомньми нетрансмиссивными генами. Указанные свойства штамма позволяют повысить точность моделирования передачи возбудителей кишечных инфекций с длительным выживанием во внешней среде (брюшной тиф, сельмо- неллезы) и упростить исследование, ввиду идентификации штамма.сопряженно с его выделением на селективной среде с гексаметилентетрамином и налидиксовой кислотой. Штамм мо- жет быть использован для изучения и контроля санитарного режима эпидемиологически важных объектов. ш (Л 4 4 а СП со

Составитель Г.Смирнова Редактор Н.Гунько Техред Л,Олийнык Корректор М.Максимишинец

Заказ 6706/30

Тираж 520

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное