Способ определения церулоплазмина в крови Советский патент 1988 года по МПК G01N33/49 G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, конкретно к биохимии.

Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощения способа.

Способ осуществляется следующим образом,

0,,0 мл исследуемой биологической жидкости разбавляют в 50- 500 раз. В кювету прибора вносят 1- 2 мл (в зависимости от количества исследуемой жидкости) раствора субстратно-буферной смеси, состоящей из ацетатного буфера и парафенилендиа- мина, при включенном термостате прибора t 37°С + 1°С. Кювету с элект- родами подсоединяют к прибору. Через отверстие в электроде вводят раствор биологической жидкости, исследуемой на активность фермента. Регистрируют ход накопления продуктов ферментативной реакции при помощи самописца (КСП-4, Н-39, Н-339),

Активность фермента оценивают как по количеству, так и по скорости максимального накопления продуктов реакции.

Субстратно-буферную гмесь готовят |Путем растворения 0,125 г парафени лендиамина солянокислого (х/ч или чда) в 25 мл дистиллированной воды, Затем к 5 мл полученного раствора до бавляют 5 мл 0,1 М ацетатного буфера Н 6,0 и 40 мл дистиллированной воды

Полученная субстратно-буферная смесь Содержит субстрат-парафенилендиамин в концентрации 4,62 мМ/л.

В соответствии с инструкцией к прибору АФ-1, на котором проводилось измерение, характеристики тока следующие: частота тока 880 кГц, сила тока 20 мкА.

Частота тока является стабильной характеристикой прибора, не подлежа- щей коррекции. Сила тока является оптимальной.

Для индикации используется типовой датчик с двумя серебрянными электродами, покрытыми керамической пористой оболочкой.

Активность церулоплазмина рассчитывают по формуле

h 1.3-10-1000 .- , X М Т5ТООО (мкмоль/л-ч),

где h - отклонение пера самописца (мВ);

Q 5 0

5

0

..

5

5

1,3 - коэффициент перехода от

показаний милливольтметра при предлагаемом способе на концентрацию церуло - плазмина при условии строгого соблюдения всех параметров опыта (мг-%); 10 - коэффициент пересчета

100 мг на 1 л; 1000 - коэффициент пересчета мг в

, мкг;

1 - длительность реакции (ч); 151000 - мол. м церулоплазмина.

Пример. 0,1 мл.сыворотки крови разбавляют в 100 раз 0,9%-ным раствором натрия хлорида, В кювету анализатора вносят 2 мл субстратно- буферной смеси, состоящей из оО,1 М ацетатного буфера рН 6,0, раствора парафенилендиамина, приготовленного из расчета 0,125 мг парафенилендиамина на 23 МП дистиллированной воды, и дистиллированной воды, Ингредиенты субстратно-буферной смеси берут в соотношении 1:1;8 соответственно. Полученная субстратно-буферная смесь содержит субстрат-парафенилендиамин в концентрации 4,62 мм/л, Кюветы помещают в термостат прибора Т 37°С, вставляют датчики с электродами и при достижении постоянной температуры подключают к прибору. Через отверстие в крышке датчика вводят 0,1 мл разведенной в 100 раз сыворотки крови белой крысы. Ход ферментативной реакции регистрируют на диаграммной ленте самописца.

Параметры работы приборного комплекса: сила тока 20 мкА; напряжение 50 мВ; скорость движения ленты самописца Н-339 180 мм/ч.

Результаты эксперимента представлены в таблице.

Оценку точности измерений проводят с помощью среднего арифметического единичных отклонений отдельных измерений от среднего арифметического. Показатель точности способа S- при коэсЬфициенте надежности 0,95 и k - 9601 0,2.71,

Таким образом, ,Е, и полностью определяют точность (воспроизводимость и правильность) анализа.

В примере точность предлагаемого способа характеризуется следующими показателями; х Ь,М1} 0,271; +т + 0,12.

Показатели точности известного способа X 1,146} 1,7 при k 7; tm ± 0,.

Чем вьппе величина показателя точности Sj тем ниже точность способа. Таким образом, известный способ является менее точным (воспроизводимым и правильным) по сравнению с предлагаемым способом.

Статистические параметры рассеяния данных активности церулоппазмина выше при использовании известного способа в связи с тем, что в нем не

1446571.

мани исследования одной пробы в 4 раза в сравнении с известным способом. Чувствительность повьшается до

10 при равенстве ее в известном способе 10.

Формула изобретения

Способ определения церулоплазми- на в крови путем внесения ее в субстратно-буферную смесь, содержащую парафенилендиамин и ацетатный буфер с последующей инкубацией исследуемой

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии. Целыо изобретения является повьаиение точности и чувствительности способа наряду с его упрощением. Для этого к раствору субстратно-буферной смеси добавляют жидкость, содержапсто фермент пропускают слабый высокочастотный ток и по величине сопротивления этому току объективно определяют скорость накопления продуктов ферментативной реакции. 1 табл.

учитывается фактическая продолжитель- 15 пробы и учетом результатов реакции.

ность индивидуальных реакций, а используется один и тот же показатель продолжительности реакций, определенный методикой (1ч).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить более точ ные и объективные данные об активности церулоппазмина, чем известш способ. Достигается еньшение вреотличаю щийся тем, что, с целью повьшения чувствительности и упрощения способа, после внесения крови в субстратно-буферную смесь через исследуемую пробу пропускают слабый высокочастотный ток, а учет результатов активности церулоплазми- на проводят по величине сопротивления этому току.