CM
Изобретение относится к способу получения новьпс биологически активных химических соединений, конкретно к способу получения полицикличес- ких ароматических производных алка- нола или их солей, обладающих биоцид ной активностью, что предполагает возможность применения этих соединений в медицине в качестве противо- опухолевых соединенийо
Цель изобретения - получение новых полициклических ароматических производных алканола, проявлякщих новый вид активности для данного ря- да соединений.
Все используемые растворители обладают необходимой сортностью и применяются без дополнительной очистки, но со следузощими дополнительны- ми обработками. Тетрагидрофуран подвергают сушке путем дистилляции над сплавом Na/K в атмосфере азота и после этого немедленно используют. Толуол подвергают дистилляции над СаН в атмосфере азота и хранят над молекулярным ситом ЗА. Используемые химикаты обладают требуемой сортностью и используются без дополнительной очистки, если нет специаль- ной оговоркио
Препаративное жидкостное хромато- графиро ание при высоком давлении осуществляют с помощью устройства Waters Prep LC/System 500 A с использованием двух колонок, заполненных каждая по 500 г селикагеля (SiO-2). Вставками из SiO,j, использовавшимися для очистки, являются вставки, изго- товленные из С11ликагеля, для импульсной хрома.тографии (E.Merck, селика- гель 60, сито N 230-400, т.е. 0,0620,037 мм). Воронку, заполненную спеченным стеклом и имекщую соответст- вующий обтьем, заполняют примерно на 3/4 SiO/j, а на нижнюю часть воронки надевают кран. Кусок фильтровальной бумаги затем помещают сверху SiO и раствор материала, подвергаемого очистке, вводят на эту верхнюю часть За счет осторожного просасывания через фильтр происходит перемещение порции элюируюв1его растворителя через вставку из селикагеля. Фракции соответствующего объема объединяют по мере необходимости и далее подвергают обработке Удовлетворительные данные элементного анализа получены для всех указанных ниже в качестве примеров соединений.
Пример 1. А.Хризен-6-карбо- новая кислота.
В круглодонную колбу, снабженную холодильником, барботером для пропускания азота и магнитной мешалкой, вводят хризен-6-карбальдегид (10,0 г 39 ммоль) и ледяную уксусную кислоту (1000 мл). Реакционную смесь нагревают, до 50°С. В полученный раствор вводят по каплям раствор ВГ2(6,2 г, 39 ммоль, 2,0 мл) в 10 мл ледяной уксусной кислоты. Реакционную смесь нагревают до 80 с в течение одного часа, обрабатывают HjO (1 мп) и охлаждают. Образующееся твердое вещество фильтруют и промывают водой. Твердое ве щество перекристаллизовывают двукратно из смеси тетрагидрофуран- толуол в соотношении 1:1, затем двукратно из тетрагидрофурана и в результате после сушки получают 3,3 г хризен-6-карбоновой кислоты с т.пл. 305°С.
В оХризеноилхлорид.
В круглодонную колбу, снабженную холодильником, барботером для пропускания азота и магнитной меша-икой, вводят хризен-6-карбоновую кислоту (2А, 3,3 г, 13 ммоль) и SOCl (щ- быток, 100 мл). После медленного подогрева реакционную смесь нагреваю с обратным холодильником с фпегмо- образованием в течение двух часов, охлаждают и избыток SOCl удаляют. Сырой твердьш продукт двукратно суспендируют в толуоле (200 мл) и растворитель удаляют во вращающемся выпарном аппарате. Данный сырой щзодук (3,5 г) далее используют без дополнительной очистки.
Со N-C2-(1,3-Диокси-2-метил)пропил }-хризенкарбоксамид.
В круглодоннзто колбу, снабженную холодильником, барботером для пропускания азота и магнитной мешалкой вводят 6-хризенош1хлорид (3,50.г, 12 ммоль), 2-амино-2-метил-1,3-про- пандиол (2,53 г, 24 ммоль) и обезвоженный Тетрагидрофуран (200 мл)„ Смесь нагревают с обратным холодильником в течение четырех часов Б течение этого времени образуется белое твердое вещество. Реакционную смесь выливают в воду (500 мл) и фильтруют. Твердое вещество растворяют в- этилацетате (700 мл), про-
31А47277
мывают водой (3 х 500 мл,) насыще.иным раствором NaCl (2 х 500 мл), высушивают () и концентрируют, в результате чего получают 4,12 г сырого белого твердого вещества Это твердое вещество растворяют в этил- ацетате (500 мл), фильтруют через воронку со средой спекшейся стекломассы и концентрируют до объема 200 мл. Горячий раствор разбав ляют до 400 мл гексаном. Образукжщеся кристаллы фильтруют и снова перекрис- таплизовьшают из смеси зтилацетат/
I р н м е р 2. 2-(6-Хризенилме- тил) амине -2-метил-1,3-пропандиол обрабатьшают газообразным НС1 в зта- ноле, получая (+-)-(2R, 3R)-2-(6- хризенил)метил амино-2-метил-1,3- бутандиол гидрохлорид с т.пл. 236,0- 237,5 с (разлож.), CHjOH/Et O.
П р и м е р 3. 2-(6-Хризенилме- 1Q тил)амино -2-метил-1,3-пропа одиол лактато
Смесь 2-(6-хризенилметш1)амино - 2-метил-1,3-пропандиола (3,45 г, 10 ммоль) и 85%-ной молочной кислоты
фильтруют и высушивают в ва- it (1,04 г, Ю ммоль) в метаноле (500мл)
гексан,
куумной печи, в результате получают 2,06 г (47,8 %) Н-С2-(1,3-диокси-2- -метил)пропил J-хризенкарбоксамида с т.пл. 170-171°С.
D. 2-С(6-Хр.изекилметш1)амино 2- метил-1,3-пропандиол-метансульфонат.
В круглодонную колбу, снабженную холодильником, барботером для продовоДят до дефлегмирования и фильтруют через воронку с пористой стеклянной плавтинкой. Растворитель удаляют с использованием роторного не- 2Q парителя, в результате чего получают более твердое вещество. Его кристаллизуют (смесь CHjOH/Et O) три раза, в результате чего получают 1,84 г (42,2 лактата -С(6-хризенилметил)
пускания азота и магнитной мешалкой, 25 aмин -2-мeтIiл-1,3-пропандиола, т.пл.
1ЬЗ-1Ь4 Со
Пример4., 2 (6-Хризенш1метил) амино -2-метил-1,3-пропандиол цитрат.
вводят (1,3-диокси-2-метил)пропил -хризенкарбоксамид (1,0 г, 2,8 ммоль) и обезвоженный .тетрагид- рофуран (100 мл). В кобу вводят тверСмесь 2- (6-хризенштметил)аминоJдый Li А1Н4(0,53 г, 14 ммоль) в виде 30 2-метил-1,3-пропа1щиола (3,45 г.
нескольких порций. Реакционная смесь быстро темнеет до получения густо коричневого цвета с вьщелением газа. Реакционную смесь перемешивают в те10 ммоль) и лимонной кислоты (1,92 г, 100 ммоль) в метаноле (500 мл) нагревают до тех пор, пока она не растворится, затем смесь фильтруют чеI р н м е р 2. 2-(6-Хризенилме- тил) амине -2-метил-1,3-пропандиол обрабатьшают газообразным НС1 в зта- ноле, получая (+-)-(2R, 3R)-2-(6- хризенил)метил амино-2-метил-1,3- бутандиол гидрохлорид с т.пл. 236,0- 237,5 с (разлож.), CHjOH/Et O.
П р и м е р 3. 2-(6-Хризенилме- тил)амино -2-метил-1,3-пропа одиол лактато
Смесь 2-(6-хризенилметш1)амино - 2-метил-1,3-пропандиола (3,45 г, 10 ммоль) и 85%-ной молочной кислоты
(1,04 г, Ю ммоль) в метаноле (500мл)
довоДят до дефлегмирования и фильтруют через воронку с пористой стеклянной плавтинкой. Растворитель удаляют с использованием роторного не- парителя, в результате чего получают более твердое вещество. Его кристаллизуют (смесь CHjOH/Et O) три раза, в результате чего получают 1,84 г (42,2 лактата -С(6-хризенилметил)
Смесь 2- (6-хризенштметил)аминоJ2-метил-1,3-пропа1щиола (3,45 г.
10 ммоль) и лимонной кислоты (1,92 г, 100 ммоль) в метаноле (500 мл) нагревают до тех пор, пока она не растворится, затем смесь фильтруют че
Изобретение касается производных оксиаминов, в частности способа получения полициклических ароматических производных алканола общей формулы I: - Y, где X 6-хризе- иил; У - CR.,.- ОН; R,C ,- Cj- алкил, замещенная гидроксигруппа; . R.2 С -С-f алкил, при условии, что R и R , взятые вместе, содержат не более пяти атомов углерода, или их солей, обладающих биоцидной ак- тивноствю, которые могут быть использованы- в медицине в качестве противоопухолевых соединений. Цель - создание вещества с активностью, не характерной для данного класса. Синтез целевых соединений ведут восстановлением соединений общей формулы II: X - C(0)-NH-Y, где X и Y - см. вьппе, гидридом металла в инертном растворителе . Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде его .соли. Новые соединения обладают активностью в отношении Лимфоцитной лейкемии Р388/0 и , Меланотической Мела- номы В16, Саркомы Н 5076, Карциномы Колон 38, Карциномы Легких Льюиса, а также в отношении Candida albicans, Mycoplasma smegmatis. Streptococcus pyogenes; Trichomonas vaginalis, Nippostrongylus brasiliensis, Eime- ria tenella при токсичности 85-250 МГ/КГ. i CO С йь 4 N J5 4
чение ночи при комнатной температуре, 35 Р воронку с пористой стеклянной
затем нагревают с обратным холодильником с флегмообразованием в течение 14 ч. Реакционную смесь резко охлаждают путем добавления насьщенного
пластинкой Далее растворитель удаляют, в результате чего получают неочищенный продукт - белое твердое вещество. Его доводят до кипения в
раствора Na.jS04.(10 мл), а затем воды 40 абсолютном этиловом спирте (2x300 мп) (50 мл). Эту реакционную смесь экстрагируют этилацетатом (3x200 мл). Слои этилацетата соединяют, промывают водой (200 мл), насыщенным NaCl (3 X 200 мл), высушивают (над
и фильтруют, в результате чего получают белое твердое вещество. Затем его подвергают перекристаллизации дважды (смесь CHjOH/Et O), фильтруют, 45 сушат в течение ночи в вакуумной печи, в результате чего получают 1,24 г цитрата 2-C(6-xpизeнилмeтил)aминo - 2-мeтил-1,3-пpoпaндиoлa, т.пл. 146- 151 С. Для оценки противоопухолевой активности новых производных алка- нола используют методы. Которые предложены в списке для опухолей в программе развития терапевтических исследований (Отделение лечения рака, Национальный институт рака).
), фильтруют и концентрируют, в результате чего получают твердое вещество рыжевато-коричневого цвета, представляющее собой 2- (6-хризешш- метил)амино 3-2-метил-1,3-пропандиол, т.пл. 200-202°С. Это твердое вещество растворяют в абсолютном этиловом спирте EtOH (25 мл) и в.СНз80зН (0,5 мл), нагревают и фильтруют. Твердое вещество разбавляют гекса- - ном до объема 500 мл, фильтруют и перекристаллизовывают, получая 0,21 г (16,9 %) указанного соединения, т.пл. .227-228°С.
абсолютном этиловом спирте (2x300 мп)
и фильтруют, в результате чего получают белое твердое вещество. Затем его подвергают перекристаллизации дважды (смесь CHjOH/Et O), фильтруют, сушат в течение ночи в вакуумной пе
чи, в результате чего получают 1,24 г цитрата 2-C(6-xpизeнилмeтил)aминo - 2-мeтил-1,3-пpoпaндиoлa, т.пл. 146- 151 С. Для оценки противоопухолевой активности новых производных алка- нола используют методы. Которые предложены в списке для опухолей в программе развития терапевтических исследований (Отделение лечения рака, Национальный институт рака).
Испытания против Лимфоцитной Лейкемии Р388/0.
В этом испытании используют мьш1ей CD2-F одного и того же пола, вес
которых составлял 20+-3 г. Контрольным и испытуемым животным в день О внутрибркяиинЛым способом вводят 10 живых клеток опухоли Р388/0. В каждом испытании используют несколько уровней доз с тем, чтобы оценить также величину LDjo для каждог соединения, группа для каждой дозы состоит из шести животных. Испытуемые соединения приготавливают либо в физиологическом соляном растворе, содержащем 0,05 % соединения Твин 80, либо в дистиллированной воде, содержащей 5% декстрозы, и вводят животным внутрибрюшинным способом на 1, 5- и 9-й день имплантации опухоли. Дозы определяют в мг/кг, в зависимости от веса тела каждого животного. Фиксируют день гибели дл каяодого животного, определяют среднее значение для каждой группы и вычисляют отношение среднего времени жизни дпя обработанной (Т) к контрольной (с) группе. Критерием активности является значение Т/С к X 100 120%.
При оптимальной дозировке 45 - 600 мг/кг Т/С X 100% (исключая оставшихся в живых на 20-й день) составляет (+130)-(+300),
Лимфодитная лейкемия L 1210, Процедура проведения; зтого испытания идентична для Р 388/0 за тем
исключе-нием, что число клетокL 1210, „ нительных тканей, затем разрезают
. f f% .. t
имплантированньк в день U, составляет Ю мьпаь. В испытании используют штаммы мьши , а в качестве критерия активности используют велина кубики размером 2-3 мм. Каждый бик имплантируют подкожным способо в брюшную торакальную область в ст рильных условиях в день 0. В каждо
чину Т-С X 100 125 %. При оптималь- 40 испытании применяют несколько доз с
ной дозировке .110 - 150 мг/кг Т/С х
X 100%, исключая оставшихся в живых
на 30-й день, составляет (+194)(+252).
Меланотическая Меланома Б16.
В этом испытании используют мышей В6СОЗ-Е одного и того же. пола, имеющих вес 20+3 г. Суспензию клеток В16 готовят из некротической части твердой ткани опухэлиJ полученной из мыши-донора. Один грамм опухоли подвергают гомогенизации в 9 мл соляного раствора Ирла, охлаждаемого льдом, и фильтруют через сито в 100 меш
тем, чтобы оценить величину LD 2о дЛя каждого соединения. В группе для каждой дозы используют десять животных, а в необработанной конт45 рольной группе ЗОживотньк. Испытуе- ые соединения готовят либо в физиологическом соляном растворе, содержащем 0,05% соединения Твин 80, либ в дистиллированной воде, содержащей
50 5% декстрозы, а затем их вводят вну рибрюшинно способом на 1-, 5- и 9-й день после имплантации опухоли. Дозы определяют на основе мг/кг в соответствии с весом каждого животного.
(О, 149 мм) с ц(глью удаления остатков55 20-й день животных усьшляют и при
ткани. О,5 Ш1 полученной в результа- помощи мерной вилки Верниера измеряют
те жидкости вводят внутрибрюшиннымнаибольшие (L) и наименьшие размеры
методом каждомз животному. Дозировку(W) каждой опухоли. Вес опухоли расосуществляют также, как в испытанияхсчитьшают из формулы L (W) 2/2 Кри
Р388/0 и L 1210. Фиксируют день гибели животного на протяжении 60 дней, а затем вычисляют отношение Т/С, как в испытаниях Р388/0 и L 1210. При оптимальной дозировке 30-100 мг/кг Т/Сх. X 100%, исключая оставшихся в живьЬс на 30-й день, составляет (+143)-(+200).
Испытание против Саркомы М5076.
Этот тип саркомы имеет вид твердой .опухоли, появляющейся у мышей штамма С57В1/6 в яичниках, и в дальнейшем ее перерабатывают в асцитную форму для внутрибрюшинного использования. Процедура этого испь1тания вдентична той, что применялась для Р388/0, при этом используют штамм мьшш ВбСЗ-Fj, а критерием активности служит величина Т/С х 100 / 125%. При -оптимальной дозировке 85 - 105 мг/кг Т/С X 100%, исключая остав- ишкся в живых на 30-й день, составляет (+1б2)-(+168).
Испытание против Карциномы 1Солон
Зй.
Эту опухоль вызывают у мышей штамма С57В1/6 химическим способом, а затем поддерживают в виде твердой 30 опзгхоли. Выращенную твердую опухоль затем вырезают в асептических условиях у мыши-донора и помещают в стерильный соляной раствор. Опухоль ос- воб ождают от некротических и соеди . f f% .. t
на кубики размером 2-3 мм. Каждый ку бик имплантируют подкожным способом в брюшную торакальную область в стерильных условиях в день 0. В каждом
40 испытании применяют несколько доз с
тем, чтобы оценить величину LD 2о дЛя каждого соединения. В группе для каждой дозы используют десять животных, а в необработанной конт45 рольной группе ЗОживотньк. Испытуе- ые соединения готовят либо в физиологическом соляном растворе, содержащем 0,05% соединения Твин 80, либо в дистиллированной воде, содержащей
50 5% декстрозы, а затем их вводят внут- рибрюшинно способом на 1-, 5- и 9-й день после имплантации опухоли. Дозы определяют на основе мг/кг в соответствии с весом каждого животного.
терием активности является значение Т/С X 100 42%.
При оптимальной дозировке 65 - 150 кг/кг Т/С X 100% составляет 23- 38.
Испытание против Карциномы Легких Льюиса.
Эта опухоль возникает спонтанно в легких мышей С57В1/6 и ее поддерживают при помощи трансплантации под кожу в данном штамме. Твердую опухоль вьфезают в асептических условия
и помещают в стерильный соляной раст- (Среда Стентона или модифицированная вор. Кусочки нивой ткани опухоли тон-15 среда Диамонда).
ко измельчают при помощи ножниц и Оценка испытания: О - ингибиро- продавливают через сито из нержавекг- вание не отмечено; (-1) - ингибиро- щей стали в 200 меш (0,074 мм) с тем, вание составляет 1-25%; (-2)- инги- чтобы можно было получить из клеток ткани опзпсоли суспензию, 10 живых клеток вводят внутривенным способом
20
бирование составляет 26-50%; (-3)- ингибирование составляет 51-75%; (-4)- ингибировакие составляет 76- 100%.
в хвостовую вену мышам BD-F., одного и того же пола весом 20±2 г. В каждом испытании используют несколько доз с тем, чтобы оценить величину для каждого соединения. В группу для каждой дозы входит десять животных и 20 животных в необработанной контрольной группе. Испытуемые соединения готовят и применяют в соответствии с процедурой для Р388/0 Фиксируют день гибели для каждого животного, определяют среднее значение для каждой группы и вычисляют отношение среднего времени жизни для обработанной (Т) к контрольной (С) группе. Критерием активности служит значение Т/С х 100-7/ 140%. При опти- ма)1ьной дозировке 85 - 105 мг/кг Т/С X 1.00% составляет (+191)-(+222).
Испытания против Candida albicans
Противогрибковое испытание против Candida albicans (CN 1863) осуществляют с небольшими изменениями с использованием комбинации анализов с разбавлением бульона и агара. МИК составляет 30-100 мг/л.
Антибактериальное испытание.
Антибактериальное испытание против Mycoplasma smegtnatis(S3264) и Streptococcus pyogenes (CN 10) ocjr- ществляют с небольшими изменениями с использованием стандартных анализов, связанных с разбавлением агара. МИК 10 мг/ло
Испытания против Mycoplasmer Smegmatiso
Результат антибактериального испытания против Mycoplasma Smegmatis
78
(53264): МИК составляет от 5 до 10 мг/л.
Испытание против простейших Frichomonas vaginalis осуществляют с использованием методов, описанных Р.М.Михаелсом.
Результаты активности против простейших Frichomonas vaginalis (в ла- бораторных условиях)
Доза, мг/л Результат 40-4
40-4
Оценка испытания: О - ингибиро- вание не отмечено; (-1) - ингибиро- вание составляет 1-25%; (-2)- инги-
0
5
35
бирование составляет 26-50%; (-3)- ингибирование составляет 51-75%; (-4)- ингибировакие составляет 76- 100%.
Испь1тание против Nippostrongylus brasiliensis.
Активность против червей Nippostrongylus brasiliensis анализируют с использованием методов, описанных Д.С.Дженкинсом и др.
Результаты активности против чер- 0 вей Nippostrongylus brasiliensis (зрелые стадии развития): МИК составляет 7/50 мг/л о
Испытание против Eimeria tenella.
Активность против простейших Eimeria tenella анализируют с использованием методов., описанных В.С.Лат- тером и Д.УнлсоноМо
Результаты испытания против простейших Eimeria tenella в лаборатор- Q ных условиях:
Доза, мг/л Результат 0,31-4
1,25-4
Оценка испытания: О - ингибирова- с ние отсутствует; (-1) - ингибирова- ние составляет 25%; (-2) - ингиби- рование составляет 26-50%; (-3) ,- ингибирование составляет 51 - 75%; (-4) - ингибирование составляет 76- 100%
LD JP для данных соединений (одной дозой; -OD - 1 самец мьшш) составляет 85-250 мг/кг.
g Формула изобретения
Способ получения полициклических ароматических производных алканола общей формулы
0
--ч
10
их солей, отличают и й- тем, что соединение общей форму
с:н21ян-с-В2
СН2-ОН
R,- C,-Cj R,-C,-C,j
алкил, замещенный
гидрокси;
алкил, при условии,
что К,и Rj, взятые
вместе содержат не
более пяти атомов
углерода,
Редайтор И.Шулла
Техред М.Ходанич Корректор Э.Лончакова
Заказ 6756/58
Тираж 370
ВНИИПИ Государственного комитета СССР
по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5
I Г CO NH-C-R2
10
СН2-ОН
где R, И R2 имеют указанные значе-
ния
подвергают восстановлению гидридом металла в инертном растворителе, и целевой продукт вьщеляют в свободном вкде или в веде его соли.
Подписное
| БюлероК., Пирсон Д | |||
| Органические синтезы | |||
| - М.: Мир, 1973, ч.1, с.480-481. |
