Способ получения производных морфолинилдоксорубицина Советский патент 1989 года по МПК C07H15/252 A61K31/706 A61P35/00 

см

Изобретение относится к способу получения новых производных доксору- бицина общей формулы

СОСНгОН ОН

НзСО NH ш

(1)

де А - водород или циангруппа, 20 бладающих про-вивоопухолевой активостью.

Цель изобретения получение но- вых производных:доксорубицина, облаающих большей активностью и меньшей 25 токсичностью, чем известные даунору- бицин и доксорубицин.

Пример 1. Получение 3 -дез- амино-3 -{А-морфолинил)-5-иминодоксо- рубицина.I30

К раствору 0,396 г 3 -дезамино- 3 -(4 -морфолинш1)доксорубицина в 5 мл сухогЪ пиридина добавляют 0,990 г п-анизипхлордифенилметана. Смеси дают возможность реагировать при комнатной температуре в темноте, в те чение примерно двух дней. Раствор охлаждают в ледяной воде и добавляют 0,5 мл метанола. Смесь перемешивают в течение 2 ч и добавляют 0,5 мл метанола. Смесь перемевшвают в течение 2 ч и доба вляют к 50 мл разбавленного бикарбоната натрия и экстрагируют метиленхлоРИДОМ. Экстракты концентрируют, получая смолеобразный j остаток, который растворяют в толуоле, концентрируют, растворяют в мети- ленхлориде и осаждают с помощью медленного добавления петролейного эфира. Осадок выделяют, повторно раство- ряют в метиленхлориде и осаждают смесью 2:1 петролейного эфира и диэтило- вого эфира, получая 14-0-п-aнизилди- фeншIмeтшI-3 -дeзaминo-3 -(4 -морфо- линиа)доксорубицина (II) в виде амор- фного твердого вещества с выходом

94%.

Вещество идентг фицируется с помо,щью 90 МГц ЯМР в СДС1з.

Раствор 0,532 г 14-0-п-аннзилдифё- нилметил-З -дезамино-З -(4 -морфоли- нш1)доксорубицина в 10 мл метиленхло- рида добавляют к 30 мл метанола, насыщенного аммиаком, при 0°С. Смесь перемещивают при в течение 1 ч, а затем ее оставляют стоять при 3 С в течение 27 ч. Растворитель в реак- ционном продукте упаривают. Остаток растворяют в 4:1 смеси метиленхлори- да и метанола и концентрируют. Опера- цию повторяют два раза, и твердое вещество растворяют в метиленхлориде, фильтруют через целит, концентрируют, растворяют в 1:2 смеси метиленхлори- да и метанола и снова концентрируют и сушат, получая 0,52 г (97%) фиолетового остатка.

Полученный остаток растворяют в 2 мл метиленхлорида и наносят на 1,5x40 см силикагельную колонку и элюируют метиленхлоридом (50 мл), а затем смесью метиленхло рида и метано- ла (99:1, 150 мл; 98:2, 150 мл; 97:3, 500 мл; 95:5, 100 мл; 93:7, 100 мп и 90:10, 200 мл). После 565 эляг ента отделяют фракцию 335 мл, фильтруют, упаривают и получают 59,9% нанесенного образца в виде ед нствен- ыого вещества. Это вещество идентифицируется как 1 4-0-п-анизилдифенш1- метил-З -дезамино-З -(4 -морфоли- нил)-5-иминодоксорубицин по данным 90 МГц ЯМР.

Образец 0,341 г полученного продукта растворяют в 20 мл 80%-ной уксусной кислоты, и раствор перемеши вают в темноте в течение 7 ч. Раствор затем разбавляют 50 мл воды и экстрагируют три раза хлороформом. Водную фазу, содержащую требуемый продукт, лиофилизуют в темноте, получая 0,29 г твердого вещества, которое растворяют в 0,1 н. уксусной кислоте. Раствор промывают хлороформом, подщелачивают бикарбонатом натрия и экстрагируют хлороформом, Трё-, буемый продукт переходит в органическую фазу, которую промывают, сушат, фильтруют и концентрируют. Остаток растворяют в смеси.хлороформа и метанола (1:10), концентрируют и сушат получая 0,228 г з -дезамино-З ( морфолинш1)-5-иминодоксорубицина. Идентичность вещества подтверждает ся данным ЯМР 300 МГц и элементным анализ ом.

Пример 2, Получение аддитивной соли кислоты.

Продукт в виде свободного основа- НИИ примера I суспендируют в 20 мл воды. Смесь перемешивают, медленно добавляют 3,2 мл 0,1 н. НС1 с получением рН 4,5. Суспендированное твердое вещество постепенно растворяется. Раствор лиофшшзуют в темноте, получая аддитивную соль кислоты - гидро- хлорид 3 -деэамино-З -(4 -морфоли- нил)-5-иминодоксорубицина с чистотой 97% по данным анализа HPLC.

Вычислено, %: С 54,35; Н 6,03; СГ 5,17; N 4,09.

Cg HseNjO. НС1-2Н О

Найдено, %: С 54,20; Н 5,96; СГ 4,33; N 4,03.

Остаток в 1,5 мл метиленхлорида наносят на силикагельную колонку размером см (200-400 меш) и элюируют метиленхлоридом (50 мл) а затем смесью метиленхлорида и метанола (99:1, 20 мл, 98:2, 300 мл, 97:3, 100 МП, 95:5, 100 мл,и 90:10, 200мл), После сбора 360 мл начального элюата

125 мл фракции упаривают, получая

0,203 г 14-0-п-анизилдифенилметил-З - дезамино-З - (З -цйано-4 -морфояинил) - 5-имннодоксорубицина.

Образец в 0,158 г полученного остатка охлаждают до и растворяют в 8 йЭп охлажденной льдом 50%-ной трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают при 0°С в течение 2 мин, а затем выливaюt в 100 мл ледяной во

Изобретение касается замещенйых гетероциклических веществ, в частности получения 3 -дeзaминo-3 -(4 -мop- )-5-иминoдoкcopyбицинa или З -дезамино- З (3 -циано-4 морфоли- нил)-5-иминодоксорубицина, обладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в меди- 1щне. Цель - создание более активных и менее токсичных веществ указанного класса Их -синтез ведут реакцией соответствующего морфолинил-доксоруби- цина ГБ нем ОН-заместитель в группе С(0)СН20Н замещают п-метокситритило- вой группой с помощью п-анизилхлорди- фенилметанаЗ с насыщени.1м аммиаком спиртовым раствором сначала при 1 ч, а затем при 26-27 ч. После удаления растворителя полученный 5-амино-14-эфир очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием элюирукяцей смеси CHjOH (объемное соотношение 99:1, причем количество GHijOH возрастает до соотношения 90:10), После очистки удаляют защитную группу с помощью CHjCOOH или ледяной CFgCOOH при комнатной температуре и выделяют целевой продукт, содержащий CN-грушгу, или превращают его в хлоргидрат обработкой 0,1 Н. НС1. Новые вещества ингибируют лейкемию L-1210, Р-388, обеспечивая время выживания мышей до 157-160% в сравнении с контролем. 1 табл. О) 4ib :л о sl 4 :о

Пример 3. К раствору 0,241 г20 ды. Водную смесь экстрагируют хлоро- З -дезамино-З -(3 -циано-4 -мор фс ли- формом ( 4x10 мл), объединенные зкст- ннл)доксорубицина в 4 мл сухого пи- ракты промывают разбавленным бикар- ридина добавляют 0,587 г п-анизил-бонатом натрия и водой, сушат над

хлордифенилметана. Раствор перемеши-сульфатом натрия, фильтруют через

вают при комнатной температуре в тем- 25 целит и упаривают. Остаток растворя- ноте в течение 44 ч. Реакционнуюют в 3 мл смеси хлороформа и метаносмесь охлаждают, разбавляют 0,5 млл а (4:1), раствор перемешивают, по

метанола, перемешивают при комнатнойкаплям добавляют 25 wi эфира. Полутемпературе в течение 3 ч, а затемчающийся в результате остаток собидобавляют к 50 мл разбавленного би-30 рают, получая 0,093 г З -дезамино-з - карбоната натрия и экстрагируют ме-(з -циано-4 -морфолинш1)-5-иминодоктиленхлоридом. Экстракты концентрируют, остаток растворяют при медленном добавлении 40 мл диэтилового эфира,получая 0,333 г (97%) 14-0-п-ани- 35 ставляет собой диастереоизомерную

зилдифенилметил-з -дезаминЬ-з -(3 - ,. um г „, ..«r,««vo V«T

циано-4 -морфолиншт)доксорубицина.

90 МГц ЯМР СДС1з,( , 13,84 (с., 6-ОН); 12,99 (с., 11-ОН); 7,82 (д., 1-Н); 6,70-7,75 (м., 2-Н, 3-Н, три- тил-арил); 5,42 (иир.с., I -H); 5,08 (шир.с., 7-Н); 4,45 (шир.с., 2, 14- Hg); 4,19 (с., 9-Ш); 4,00 (с., ОСИ,); 3,79 (с., OCHj); 3,30-4,15 (м, 4 -Н, 5 -Н, , , ); 1,60-3,10 (м. , 2 -Hg, 8-Н.2, 5 -Hf, 10-Н, З -Н); 1,13 (д., 6«-Нэ).

Раствор 0,369 г 14-0-п-аиизилдисмесь. Анализ HPLC на колонке Уотерс Радиал-Пак С-18 с использованием смеси 0,05 М рН 4 цитратного буфера и метанола (40:60) показывает пики при

40 18,4 и 25,0 мин в соотношении 69:31. Спектр 300 МГц данного продукта показывает два резонанса для 1-Н, 2-Н, 3-Н, 1 -Н,. 7-Н, 14-Н2, 9-ОН, OCHg, 1ОА-Н и 6 -Н 5 протонов.

45, 300 МГц ЯМР СДС1з , cf : 15,61 (с., 11-ОН); 13,74 (д., 6-ОН); 9,27 (д., Ш); 8,21 и 8,19 (2 д., 1-Н); 7,73

и 7,72 (2 т., 2-Н); 7,33 и 7,32 (2 д., 3-Н); 5,77 и 5,72 (2 д., I -H); фенилметил-3 -дезамино-З -(3 -циано- 50 5,4j.,H 5,38 (2 м., 7-Н); 4,79 и 4,77 4 -морфолинил)доксорубицина в 8 мл(2с., 14-Не); 4,72 и 4,66 (2 с.,

S-OH); 4,15 и 4,14 (2 с., ОСН); 4,04 (м., 5 -Н); 3,97 (м., , 2 В-Н); 3,75 (м., , 4 -И); 553,59 (м., 2 А-Н); 3,23 (д., 10В-Н); 3,03 (м., 10А-Н, ); 2,72 (м., ); .2,33 .(м., 8В-Н); 2,14 (м., 8А-Н); 1,85 (м., 2 -Н); 1,38 и 1,37

метиленхлорида добавляют к 25 мл метанола, насьщенного аммиаком, при . Смесь перемешивают при в течение 1 ч, а затем ее оставляют стоять при течение 26. ч. Реак ционную смесь упаривают до полного удаления аммиака и получают 0,376 г фиолетового остатка.

(2 д., 6 -Из).

сорубицина.. ,

Анализ HPLC и 300 МГц ЯМР указывает на то, что данное вещество пред35 ставляет собой диастереоизомерную

,. um г „, ..«r,««vo V«T

смесь. Анализ HPLC на колонке Уотерс Радиал-Пак С-18 с использованием смеси 0,05 М рН 4 цитратного буфера и метанола (40:60) показывает пики при

40 18,4 и 25,0 мин в соотношении 69:31. Спектр 300 МГц данного продукта показывает два резонанса для 1-Н, 2-Н, 3-Н, 1 -Н,. 7-Н, 14-Н2, 9-ОН, OCHg, 1ОА-Н и 6 -Н 5 протонов.

45, 300 МГц ЯМР СДС1з , cf : 15,61 (с., 11-ОН); 13,74 (д., 6-ОН); 9,27 (д., Ш); 8,21 и 8,19 (2 д., 1-Н); 7,73

(2 д., 6 -Из).

51

УФ-Вис (CHgOH) марке., 221 им . ( 31000), 252 (32900), 307 (7100), 520 плечо (91Ю), 551 (17400), 592 (20700), ДС1-КС м/е 638 (), 611 (M H-HCN).

Вычислено, %: С 58,62; Н 5,69; N6,41.

СзвНз М Ог -НсО

Найдено, Z: С 58,79; Н 5,47, N 6,30.

Соединения иэо.бретения обладают полезностью в качестве противоопухолевых агентов для млекопитающих Данная активность подтверждается данны ми исследований in vivo и in vitro.

Среднее время выживания различных обработанных ь&ппей определяется и сравнивается с временем для мьшей, инокулированных лейкемийной асцитной жидкостью, но которым не дается ника кого лечения испытываемыми соединениями. Данные, полученные таким образом, представлены в таблице. Данные представлены в виде величин Т/С, которые представляют собой время выживания обработанных мьшей, деленное на время выживания контрольных и умноженное на ЮО. В таблице даются также уровни дозировки различных сое динений, которые наблюдаются для получения наилучших результатов улучшения времени выживания. Формула изобретения

Способ получения производных морфолинил-доксорубицина общей фор- мулыQ он СОСН/Ж

ОН

4507496

где А - водород или цианогруппа, отличающийся тем, что соединение общей формулы

5О ОН

СрСНгОН ОН

НзСО О ОН

I- 15

0

5

где А - имеет указанные значения, а оксигруппа в CO-CHjOH-rpynne защищена неустойчивой умеренно кислотной защитной группой, такой как п-меток- си-тритиловая группа, подвергают взаимодействию при температуре в течение 1 ч и затем при температуре 3°С в течение 26-27 ч с насыщенным аммиаком спиртовым раствором с получением сырого 5-амино-14-эфира, который после удаления растворителя подвергают очистке колоночной хрома0 тографией на силикагеле с использованием в качестве элюирующей системы, смеси СН.гС1(г-СНо,ОН/99:1 V/V с возрастающим количеством СНй,ОН до 90:10 V/V, получая чистый 5-амино-14-эфир,

g который для удаления вышеупомянутой неустойчивой умеренно кислотной за- 1ЦИТНОЙ группы в 14 положении обрабатывают уксусной кислотой или ледяной трифторуксусной кислотой при комнатной температуре, получая целевой продукт в виде свободного основания, которое выделяют, когда А CN, или, если А Н, превращают в его хлор- гидрат путем обработки 0,1 н. хлорис- то-водородной кислотой, о

Доксо|)у6ицин

З -деамино-З -(4 - морфолинил (-5-имино- Доксорубицин

З -деамино-3 -(4 - (Морфолинил-З -циано)- |5-иминодоксорубицин

0,031 0,047 157

160

252 7,5 внутрибрл- шинно

2,0 внутрибрю- шинно

2,5 внутривенно

4,0 внутрнбрю- шинно

0,5

165 0,8 внутрйбрю- шинно