Питательная среда для выделения и отбора микроорганизмов-продуцентов бактериальной @ -глюканазы Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 C12N9/48 C12N1/20 C12R1/125 

1

Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для экспресс-методов выделения и отбора микроорганизмов - продуцентов (У -глюканазы.

Цель изобретения - повьш1ение степени точности выделения и отбора активных штаммов - продуцентов -глюканазы.

Изобретение заключается в том, что для выделения и отбора активных продуцентов у}-глюканазы используется агаризованная питательная среда, содержащая пептон, глюкозу, гидро- лизат дрожжей, минеральные соли, в

10

10

том числе калий фосфорнокислый как активатор биосинтеза уЗ-глюканазы, а в качестве субстрата - лихенин, окрашенный активным красителем ярко- оранжевьм ЖТ, расщепляемый микроорганизмами, продуцирующими Jb -глюкана- зу до олигосахаридов, которые благодаря меньшему молекулярному весу диффундируют в гель агара, на которой о выделении и отборе активных продуцентов J3 -глюканазы судят по величине зон расщепления лихепина вокруг колонии, которые выгля- :,р;ят прозрачнь ми на оранжевом фоне.

СП

j

00 «4

10

3U548A8

Пример 1. Приготовление пиательной среды. Для выделения и отора микроорганизмов - продуцентов -глюканазы готовят плотную питаельную среду следующего состава, ае.%:

Агар-агар 3,0 Пептон2,0

Глюкоза0,1

Гидролизат дрожжей0,3 Натрий хлористый 0,5 Калий фосфорнокислый двухзамещенный 0,1 Лихенин окрашенный 0,15 ВодаОстальное Растворяют 10 г лихенина из Cet- aria islandica в 600 мл 0,1 М растора натрия фосфорнокислого трехза- 20 ещенного при 70°С. К этому раствору (рН 10) при перемешивании добавляют 400 мл 0,14 М раствора красителя яро-оранжевый ЖТ.

Реакцию проводят 2 ч при 70 С и 25 постоянном перемешивании. Из охлажденной реакционной смеси продукт осаждают этиловым спиртом в соотношении 1:1,5 об/об, т.е. 1,5 л. Осадок отмывают от остатков непрореаги- ЗО ровавшего красителя 80%-ным этанолом. После этого осадок еще два раза промывают 96%-ным этиловым спиртом и высушивают.

Питательную среду в объеме 500 мл готовят следующим порядком. К 450 мл воды добавляют и растворяют 15 г агар-агара, 10 г пептона, 0,5 г глюкозы, 1,5 г гидролизата дрожжей, 2 5 г натрия хлористого и 0,5 г ка- дд ЛИЯ фосфорнокислого двухзамещенного, раствор кипятят 2-3 мин при интенсивности перемешивания до полного растворения. К 50 мл воды добавляют 0,75 г лихенина окрашенного, подогре

15

вают до и постоянно перемешивают в течение 20 мин. После этого все компоненты объединяют, доводят рП до 7,2 NaOH и автоклавируют при в течение 40 мин.

Питательную среду охлаждают до Иаразливают по стерильным чашкам Петри (в одну чашку 10 мл). Для проверки стеротьности питательную среду в чашках Петри вьщерживают в термостате при 37 С в течение 24 ч.

Технология приготовления питатель- среды аналогична . примеру 1, а

50

кол1етество ингредиентов в четырех вариантах представлено в табл. 1.

На вьшеуказанной питательной среде стерильные чашкз Петри засевают приготовленным материалом из различных природных объектов или музейные штаммы микроорганизмов. Засеянные чашки Петри помещают в термостат при 37°С на 48 ч. Микроорганизмы, продуцирующие у/2 -глюканазу, оценивают по величине зон расщепления лихенина вокруг колонии. Зоны расщепления лихенина четко выражены, прозрачны в оранжевом фоне.

Результаты четырех вариантов питательной среды при выделении и отборе продуцентов J3-глюканазм приведены в табл. 2.

Результаты опытов cBi-щетельствуют о том, что предлагаемая питательная среда для выделения и отбора продуцентов Jb -глюкаиазы содержит все необходимые компоненты, обеспечивающие в процессе культивирования направленный биосинтез фермента f -глюканазы. Определены опт1ьмальные дозы компонентов в питательной среде. Как видно из данных табл.1 и 2, малые дозы компонентов (вариант I) не дают положительного эф45екта,, а большие (вариант IV) экономически не выгодны.

Доказательство преимущества питательной среды с лихенином окрашенным и известной питательной средой по выделению и отбору продуцентов jl-глю- каназы представлены в табл. 3.

Данные в табл. 3 свидетельствуют о точности и направленности питательной среды для выделения и отбора продуцентов f -глюканазы.

Формула изобрете

н и я

0

Питательная среда для вьщеления и отбора микроорганизмов - продуцентов бактериальной j5-глюканазы, содержащая агар-агар, пептон, глюкозу, гидролизат дрожжей, субстрат и воду,

отличающаяся тем, что, с целью повьш1ения степени точности выделения и отбора активных штаммов - продуцентов J -глюканазы, она допол- нительно содержит хлористый натрии, фосфорнокислый двухзамещенный калий, а в качестве субстрата - лихенин,

. окрашенный активным красителем ярко51454848

оранжевым ЖТ, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Гидролизах дрожжей 0,3-0,4 Хлористый натрий 0,5-0,7 Фосфорнокислый двух

Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для экспресс-методов выделения и отбора микроорганизмов продуцентов Jb -глюканазы. С целью повьше- ния точности выделения и отбора активных штаммов - продуцентов Jb -глюканазы в питательную среду, содержащую пептон, глюкозу, гидролизат дрожжей, минеральные соли, внося г в качестве субстрата лихенин, окрашенный активным красителем ярко-оранжевьп-{ ЖТ, который расш;епляется продуцентами J -глюканазы до олигосахаридов, диффундирующих в гель агара. О выделении и отборе активных продуцентов уз-глюканазы судят по величине зон расщепления лихенина вокруг колоний. Среда имеет следующее соотношение компонентов, мас.%: агар-агар 3,0- 3,5, пептон 2,0-2,3; глюкоза 0,1- 0,12; гидролизат дрожжей 0,3-0,4; натрий хлористый 0,5-0,7; калий фосфорнокислый двухзамещенный 0,1-0,12; лихенин окрашенный 0,15-0,18; вода остальное. Среда позволяет быстро и точно отобрать активные продуценты о -глюканазы. 3 табл. (g

Калий фосфорнокислый двухзамещенный

Лихенин окрашенный Вода

0,08 0,1 0,12 0,15

0,1 . 0,15 0,18 0,20

Остальное Остальное Остальное Остальное

Bacillus subtilis EN

18

15,3

-ГА - -глюканазная активность.

Таблица2

18,7

22

19,0

20

РедакТ ор Н. Киштулинец

Составитель В. Соина Техред М.Ходанич

Заказ 7411/30

Тираж $2а;.

ВНЙИПИ Государственного комитета по изобретениям и откры -иям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., Д. /5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таблица 3

Корректор С.Шекмар

Подписное