Питательная среда для выделения и отбора микроорганизмов-продуцентов протеазы Советский патент 1986 года по МПК C12N1/20 C12N9/48 C12N1/20 C12R1/07 C12R1/66 

Изобретение относится к микробиологии и касается состава питательньЕх сред для вьщеления отбора и селекции -шкроорганизмов-продуцентов протеазы Цель изобретения - повышение степени точности выделения и отбора активных штаммов-продуценогоБ протеазы. Сущность изобретения заключается в том, что для отбора активных продуцентов протеазы используется агаризо ванная питательная среда, содержащая бромкрезолпурпур, казеин технический рептон, дрожжевой экстракт и минерал ныв соли5 на которой о выделении активных продуцентов протеазы судят по величине зон гидролиза казеина вокру колоний, которые выглядят прозрачными на светло-фиолетовом фоне.

Пример 1. Приготовление питательной среды. Отбор и выделение продуцентов проводят на плотной питательной среде следующего состава, г/дм воды:

Аг ар-агар35,0

Казеин технический 4,0 Пептон5,0

Глюкоза1,, О

Дрожжевой гидролизат 1,0 Хлористый кальций 0,003 Сернокислый магний 0,005 Бромкрезолпурпур 0,016 Размешивают 35 г порошка сухого питательного агара, выпускаемого Дагестанским научно-исследовательским институтом питательных сред, в 400 см воды и кипятят 2 мин при интенсивном. перемешивании до полного растворения

Нагревают 400 см воды до 85°С, подщелачивают до рН 8,5 и прибавляют 4 г сухого технического казеина, всыпая постепенно при непрерывном перемешивании. После прибавления казеина снова устанавливают прежнюю реакцию. Размешивание производится постоянно, а подделачивание несколько раз через каждые 15 мин,до полного растворения казеина.

К 100 см подогретой до 85°С воды добавляют остальные компоненты и перемешивают до полного их растворения После этого все компоненты перемеши- Эают, коррелируют рН до 7,4, доводят водой до 1000 м и автоклавируют при в течение 30 мин. Далее среду охлаж;даюТ: до 50,0 и разливают по стерильным чашкам Петри (по 10-12 мп) . и для проверки на стерильность чашки

15

0

5

0

5

0

5

0

5

со средой помещают в термостат при 37 с на 24 ч.

П р и м е р 2. При подборе компонентов питательной среды проведена экспериментальная работа, результаты которой представлены в табл. 1.

В таблице подчеркнуты оптимальные дозы компонентов, которые дают положительный эффект. Малые дозы компонентов или увеличенные концентрации сверх оптимального уровня не стимулируют гидролиза штаммамз1-продуцен- тами протеазы.

П р и м е р 3, Выделение и отбор продуцентов прот(газы. Стерильные чашки Петри засевают приготовленным материалом из различных природных объ- - ектов. Помещают н термостат при 37°С на 36 ч. Микроорганизмы, продуцирующие протеазу, оценивают по величине

зон гидролиза каяеина культуры вокруг f

колонии. Зоны гидролиза казеина четко выражены, прозрачны на светло- фиолетовом фоне.

Питательную среду можно использовать для ведения контроля инфильнос- ти во время биосинтеза протеазы и ci- амилазы в ферментерах.

П р и м е р 4. Преимущества предлагаемого изобретения и его эффект . для отбора активных продуцентов протеазы приведены в табл. 2.

Как видно, на предлагаемой среде протеолитическая активность в 2-5 раз выше, чем на известной.

Установлена прямая зависимость между соотношением величины колонии продуцента и зоны гидролиза казеина, а также протеолитической ;1ктивнос-тью.

Преимуществом предлагаемой питательной среды является более точный отбор активных продуцентов протеазы за счет содержания в ней главным образом казенна -технического и бром- крезол пурпура, по; воляюш {х по глубоким зонам падролиза казеина определить наиболее активные продуценты протеазы.

Формула из:1бретения

Питательная среда для выделения и отбора микроорганизмов-продуцентов протеазы, содержащая источники углерода, азота, источник казеина, минерапьные соли, агар-агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения степени точности

Продолжение табл. 2

Составитель В.Соина Редактор Т.Митейко Техред Л.Олейник Корректор М.Самборская

Заказ 7020/23 Тираж 490Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, Д.

Изобретение относится к области микробиологии и касается состава питательных сред для вьщеления, отбора и селекции микроорганизмов - продуцентов протеазы. Целью изобретения является повьшение степени точности вьщеления и отбора активных штаммов - продуцентов протеазы. Сущность изобретения заключается в том, что для отбора активных продуцентов протеазы используется агаризованная гштатель- ная среда, содержащая .бромкрезолпур- пур, казеин технический, ;lienToH, глюкозу, дрожжевой экстракт и минеральные соли при следующем соотношении компонентов, г/дм воды: агар-агар 35,0-40,0; казеин технический 4,0- 6,0; пептон 5,0-7,0; глюкоза 1,0-2,0; хлористый кальций 0,003-0,005; серно- g кислый магний 0,005-0,007; бромкре- золпурпур 0,016-0,018. Отбор активных продуцентов протеазы на предложенной среде производят по величине зон гидролиза казеина вокруг колоний, которые выглядят прозрачными на светло-фиолетовом фоне. 2 табл. (/)