Способ определения индивидуальной чувствительности к левамизолу при ревматоидном артрите Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 G01N33/49 

1

Изобретение относится к медицине, в частности к ревматологии, и может быть использовано для лечения больных ревматоидным артритом (РА) путем выявления иммунологическим методом среди них лиц с хорошим прогнозом для лечения иммуностимуляторами.

Цель изобретения - повьш1ение точности прогноза.

Способ осуществляется следующим образом.

Для прогнозирования лечения лева- мизолом подбирают больных РА I-II степени активности процесса с предшествующей неэффективностью лечения

10

15

другими базисными препаратами или их непереносимостью.

Мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови человека выделяют центрифугированием гепаринизирован- ной венозной крови в градиенте плотности (1,077 г/мл) фиколла-верогра- фина. Собранные с интерфазы МНК трижды отмывают фосфат-забуференным физиологическим раствором (рН 7,2-7,3) и готовят клеточную суспензию в куль- туральной среде. Выход МНК в среднем составляет х 10 клеток из 1 мл крови. Их разделяют на несколько проб. В одной из них определяют из4 СП

сд

со

00

1455318

начальное количество вЕ-РОК. Для этого свежие эритроциты барана (ЭБ) трехкратно отмывают в физиологическом растворе, далее готовят 1%-ную суспензию. Смесь ЭБ (0,2 мл) и МНК . (0,2 мл 2,5 X 10 в 1 мл) центрифугируют при 1000 об/мин 5 мин, инкубируют 90 мин при , а затем 16- 18 ч при 4°С. Затем надосадок сливают, клетки ресуспендируют и подсчитывают процентное содержание вЕ-РОК. В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ФГА Тс. Культивирование клеток осу- |ществляют в герметически закрытых I стеклянных флаконах из-под пеницил- |лина. Взвеси МНК (1 к 10 клеток/мл в среде 199+20% сыворотки IV группы) соответственно преинкубируют 24 ч, инкубируют ФГА 10 мкг/мл 72 ч. Затем первичную культуру лимфоцитов обрабатывают 30 мин митомицином С, Затем лимфоциты отмывают средой 199 и вносят в культуры аллогенных доноров при соотношении клеток 1:1. Вторичные культуры стимулируют ФГА 10 мкг/мл. Интенсивность пролиферации учитывают через 72 ч по включении НЗ-тимидина (удельная активность -15-25 Ки/моль) в нуклеопроте- идные фракции клеток. Н -тимидин добавляют за 4 ч до окончания куль- т ивирования в конечной концентрации 4 мКи/мл на флакон. После окончания Культивирования клетки отмывают однократно холодным фосфат-забуферен- нЫм физиологическим раствором, инкубируют в течение ночи в 5%-ном (вес/

10

Тс не менее чем на 6% и индуцированных ФГА Тс не менее чем на 5,5% счи тают целесообразным назначение левами зол а.

Пример 1. Больная Н., 27 лет Клинический диагноз: классический ре матоидный артрит, серопозитивный, медленно прогрессирукщее течение, ак тивность II, рентгенологическая стадия III. НФ-1.

Содержание вЕ-РОК 55%, изменение содержания под влиянием левамизола in vitro 32%. Изначальная активность

15 неспецифических Тс: спонтанные 14%, индуцированные ФГА 15%, изменение ак тивности Тс под действием левамизола in vitro: спонтанные 37%, индуцированные ФГА ,25%. Сравнение полученных значений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-РОК у данной больной повышено, а активность неспецифических Тс снижена. По влиянием левамизола in vitro проис25 ходит достоверное изменение показателей, их суммарная информативность равна 13,3. Отсюда вероятность поло жительного клинического эффекта у больной составляет 95%, при вероят30 ности отрицательного эффекта 5%, на начение левамизола оправдано. Больной назначен декарис по 150 мг 1 ра в неделю, что привело к уменьшению выраженности суставного синдрома в течение года, начиная с 4 мес лечения, снижению активности воспалительного процесса и замедлению про- грессирования эрозивного артрита.

П р и м е р 2. Больная С., 39 ле

20

35

//объем) растворе трихлоруксусной ки- до Клинический диагноз: определенный

слоты. Нерастворимые фракции переносят на миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,23 или 0,4 мкм, которые затем помещают в сцинтилляционные виалы. Радиоактивность эксперимен- в тального материала подсчитывают в сцинтилляционном счетчике Mark-30. Параллельно в пробах МНК определяют чувствительность к левамизолу. Для этого предварительно МНК больных РА д инкубируют с 1 мкг/мл левамизола ( X 10 клеток в среды 199 в течение 1,5 ч при 37°С). Затем определяют значения тех же показателей под действием левамизола.

При изначальном содержании вЕ- РОК более 37,5% и снижении их под действием левамизола не менее чем на 4%, повышении активности спонтанных

ревматоидный артрит, серопозитивньм медленно прогрессирующее течение, а тивность I, рентгенологическая стадия II, НФ-1. Содержание вЕ-РОК 57% изменение содержания под влиянием левамизола in vitro 30%. Активность неспецифических Тс:с юнтанные 0%, индуцированные ФГА 0%. Изменение ак тивности Тс под действием левамизол in vitro: спонтанные 67%, индуцированные ФГА 28%. Сравнение полученны значений с нормативными свидетельст вовало о том, что содержание вЕ-РОК у этой больной повышено, а активнос Тс равна О Под влиянием левайизола in vitro изменились значения показ телей, их суммарная информативность равна 13,3; назначение левамизола о равдано. Клинически наблюдался поло

Тс не менее чем на 6% и индуцированных ФГА Тс не менее чем на 5,5% считают целесообразным назначение левами зол а.

Пример 1. Больная Н., 27 лет. Клинический диагноз: классический ревматоидный артрит, серопозитивный, медленно прогрессирукщее течение, активность II, рентгенологическая стадия III. НФ-1.

Содержание вЕ-РОК 55%, изменение содержания под влиянием левамизола in vitro 32%. Изначальная активность

5 неспецифических Тс: спонтанные 14%, индуцированные ФГА 15%, изменение активности Тс под действием левамизола in vitro: спонтанные 37%, индуцированные ФГА ,25%. Сравнение полученных значений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-РОК у данной больной повышено, а активность неспецифических Тс снижена. Под влиянием левамизола in vitro проис5 ходит достоверное изменение показателей, их суммарная информативность равна 13,3. Отсюда вероятность положительного клинического эффекта у больной составляет 95%, при вероят0 ности отрицательного эффекта 5%, назначение левамизола оправдано. Больной назначен декарис по 150 мг 1 раз в неделю, что привело к уменьшению выраженности суставного синдрома в течение года, начиная с 4 мес лечения, снижению активности воспалительного процесса и замедлению про- грессирования эрозивного артрита.

П р и м е р 2. Больная С., 39 лет.

0

5

Клинический диагноз: определенный

ревматоидный артрит, серопозитивньм, медленно прогрессирующее течение, активность I, рентгенологическая стадия II, НФ-1. Содержание вЕ-РОК 57%, изменение содержания под влиянием левамизола in vitro 30%. Активность неспецифических Тс:с юнтанные 0%, индуцированные ФГА 0%. Изменение активности Тс под действием левамизола in vitro: спонтанные 67%, индуцированные ФГА 28%. Сравнение полученных значений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-РОК у этой больной повышено, а активность Тс равна О Под влиянием левайизола in vitro изменились значения показателей, их суммарная информативность равна 13,3; назначение левамизола оправдано. Клинически наблюдался поло514553186

кительный эффект в течение 1,5 лет 6 таблеток в сутки, через 2 мес де- получения больной декариса по 130 мг карие был отменен как неэффективньш. в неделю..Таким образом, предлагаемьй компПример 3. Больная Д., 24 го- ,. леке иммунологических показателей да. Клинический диагноз: ревматоид- обладает высокой прогностической мошно- ный артрит, серопозитивный, медлен- стью распознавания эффективности лече но прогрессирующее течение, активность ния левамизолом (95%-ная вероятность II, рентгенологическая стадия II, прогноза по сравнению с 78% по прото- НФ-11.10 типу).

Содержание вЕ-РОК 17%, которое под

влиянием левамизола in vitro повыси- Формула изобретения лось до 19%. Активность неспецифических Тс: спонтанные 11%, индуцирован- Способ определения индивидуальные ФГА 15%, Под влиянием левамизола 15 ной чувствительности к левамизолу in vitro изменения их активности не при ревматоидном артрите, включающий произошло. Сравнение полученных зна- забор крови, вьщеление мононуклеаров, чений показателей с нормативными сви- определение числа спонтанных и фито- детельствовало о том, что содержание гемагглютинин индуцированных Т-суп- вЕ-РОК и .активность Тс в данном слу- 20 рессоров в присутствии левамизола, чае понижены и под действием левами- отличающийся тем, что, зола in vitro не произошло достовер- с целью повьтенкя точности способа, ного изменения этих показателей. Сле- в крови дополнительно определяют ко- довательно, вероятность того, что личество восстановленных Е-розеткооб- лечение левамизолом у данной больной 25 разующих клеток и при повышении ко- неэффективно, составляет 95%. Наз- личества супрессоров и увеличенном начение препарата не оправдано. содержании восстановленных Е-розеткоЛействительно, прием больной дека- образующих клеток по сравнению со риса по 150 мг привел не к уменьше- здоровыми лицами и при снижении их нию признаков суставного синдрома, зо количества под действием левамизола а к активизации процесса. Больная на 4% и более определяют наличие ин после 4 мес приема левамизола была дивидуальной чувствительности к

.вынуждена увеличить дозу метиндола до левамизолу.

Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии, предназначено для лечения больных ревматоидным а тритом (РА) путем выявления иммунологически лиц с хорошим прогнозом для лечения иммуностимуляторами (например, левамизо- лом). Цель изобретения - повышение точности прогноза. Для этого выделяют мононукпеарные (МНК) клетки периферической крови, делят их на нес- колько проб. В одной из них определяют кол-во восстановленных Е-розеткооб- разующих клеток (вЕ-РОК). В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ФГА Тс (фитоге- магелютининов Т-супрессоров) в присутствии левамизола. При повышении кол-ва супрессоров и увеличенном содержании Ве-РОК по сравнению с показателями у здоровых лиц и при снижении их кол-ва под действием левамизола на 4% и более делают вывод об индивидуальной чувствительности к ле- вамизолу. i (Л