Способ определения индивидуальной чувствительности больных ревматоидным артритом к лечению левамизолом Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к ревматологии, и может быть использовано для лечения больных ревматоидным артритом (РА) иммуностимуляторами .

Цель изобретения - повышение точности определения за счет снижения побочных явлений и сокращение сроков лечения.

Способ осуществляют следующим образом.

Известными методами больных РА отбирают для лечения левамизолом. Целесообразнее это сделать по предлагаемому способу прогноза эффективности назначения левамизола при РА. Сначала у больных РА прогнозируют эффект от назначения препарата. По этому способу левамизол назначают больным со сниженной активностью Т-супрессоров, спонтанных и индуцированных ФГА, и повышенным содержани- ем вЕ-РОК. Мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови человека выделяют центрифугированием гепари- низированной венозной крови в градиенте плотности (1,077 г/мл) фикола- верографина. Собранные с интерфазы МНК трижды отмывают фосфат-забуферен- ным физиологическим раствором (рН 7,2- 7,3) и готовят клеточную суспензию в культуральной среде. Выход МНК в среднем составляет 1, клеток из 1 мл крови. Их разделяют на несколько проб. В одной из них опреде ляют изначальное количество восстановленных Е-розеткообразующих клеток (вЕ-РОК). Для этого свежие эритроциты барана (ЭБ) трехкратно отмывают в физиологическом растворе, далее готовят 1%-ную суспензию. Смесь ЭБ «(0,2 мл) и МНК (0,2 мл 2,5 10fe в мл) центрифугируют при 1000 об/мин 5 мин, инкубируют 90 мин

при 37°С и затем 16-18 ч при 4°С. Надосадок сливают, клетки ресуспен- дируют и подсчитьшают процентное содержание вЕ-РОК.

В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ФГА Т-супрессоров. Культивирование клеток осуществляют в герметически закрытых стеклянных флаконах из-под пенициллина. Равные взвеси МНК (1-Ю6 кл/мл) в среде 199+20% сызо- ротки 4 группы крови соответственно инкубируют 24 ч,инкубируют ФГА Юмкг/м

л

50422 4

дия III, НФ-1. Активность неспецифических Т-супрессоров до начала лечения: спонтанные 24%, индуцированные ФГА 21%, после действия левамнзола ин витро: спонтанные 42%, индуцированные ФГА 37%. Содержание вЕ-РОК до начала лечения 58%, под действием левамизола ин витро 46%. Больной назначен левамизол по 150 мг 1 раз в неделю. Через 2 мес определена активность неспецифических Т-супрессоров: спонтанные 38%, индуцированные ФГА 34%, т.е. произошло повы10

Изобретение относится к иммунологии и ревматологии. Цель- повышение точности определения. Левамизол назначают при снижении активности спонтанных и индуцированных T-супрессоров и повышенном содержании восстановленных Е-розеткообразующих клеток. Через 2 мес определяют содержание спонтанных и индуцированных фитогемагглютинином T-супрессоров. Если эти показатели повышаются до нормы, то лечение продолжают. Способ позволяет уменьшить количество побочных явлений и сократить сроки лечения.

72 ч. Затем первичную культуру лимфо- шение от изначальных значений до пре- цитов обрабатывают 30 мин митомици- ном С. Лимфоциты трижды отмывают средой 199 и вносят в культуры аллоген- ных доноров при соотношении клеток 1:1, Вторичные культуры стимулируют 20 ФГА 10 мкг/мл.

Интенсивность пролиферации учиты- вают через 72 ч по включению Н- -тими- дина (удельная активность 15делов нормальных. Лечение было продолжено. Получен хороший клинический эффект в течение всего года приема препарата. I

П р и м е р 2. Больная X., 41 год. Клинический диагноз: классический ревматоидный артрит, активность II, серопозитивный, медленно прогресси25 Кю/ммоль) в нуклеопротеидные РУ1011 6 течение, рентгенологическая

ции клеток. Н -тимидин добавляют за 4 ч до окончания культивирования. Клетки отмывают однократно холодным фосфат-забуференным физиологически

стадия III, НФ-II. До начала лечения содержание вЕ-РОК 48%, под действием левамизола ин витро 31%. Активность неспецифических Т-супрессоров до нараствором, инкубируют в течение ночи JQ чала лечения: спонтанные 0%, индуци- в 5%-ном (вес/объем) растворе трихлор- рованные ФГА I1%, под действием лева

уксусной кислоты. Нерастворимые фракции переносят на миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,23 или 0,4 мкм, ко- торые затем помещают в сцинцилляцион- ные виалы. Радиоактивность экспериментального материала подсчитьшают в сцинцилляционном счетчике. Эти показатели крови определяют перед началом лечения и при содержании вЕ-РОК больше 37,5%, изменении под действ и- ем левамизола на 4% и более, увеличении активности спонтанных Т-супрессоров на 6% и более и индуцированных ФГА Т-супрессоров - на 5.,5% и более, , левамизол назначают больным РА по 150 мг 1 раз в неделю.

Через 2 мес со дня начала лечения в периферической крови больных указанными методами определяют содержание спонтанных и ФГА индуцированных Ттсупрессоров. В случае,, если эти показатели повышаются до нормы, лечение продолжают.

Пример 1. Больная М„, 33 года-. Клинический диагноз: классический ревматоидный артрит, серопозитивный, активность 1, медленно прогрессирующее течение, рентгенологическая ста

шение от изначальных значений до пре-

делов нормальных. Лечение было продолжено. Получен хороший клинический эффект в течение всего года приема препарата. I

П р и м е р 2. Больная X., 41 год. Клинический диагноз: классический ревматоидный артрит, активность II, серопозитивный, медленно прогрессистадия III, НФ-II. До начала лечения содержание вЕ-РОК 48%, под действием левамизола ин витро 31%. Активность неспецифических Т-супрессоров до на

мизола ин витро: активность спонтанных Т-супрессоров 23%, индуцированных ФГА 30%. Больной назначен дека- рис по 150 мг 1 раз в неделю. Через 2 мес определена активность неспецифических Т-супрессоров: спонтанные 17%, индуцированные ФГА 20%, т.е. нормализации сниженной активности неспецифических Т-супрессоров не произошло, тем не менее лечение было продолжено, но эффекта от лечения не было. Оставалась выраженная боль в суставах, держалась утренняя скованность, сохранялась активность процесса и через 6 мес декарис был отменен.

Пределы числовых значений парамет- ров определяют точностью аппаратуры, пригодной для медицинских целей. Процент развития разнообразных побочных эффектов при лечении левамизолом колеблется от 20 до 74%. И хотя были предложены методы прогноза эффективности назначения препарата, вопрос контроля эффективности в процессе лечения не снимается. По известному способу срок лечения обычно длится

год, некоторые авторы рекомендуют его сократить до 6 мес.

По предлагаемому способу в случае отрицательного эффекта его можно сократить до 2 мес. Следовательно, способ позволяет сократить срок бесполезного, а иногда и вызывающего побочные эффекты, приема препарата у ю больных с отрицательным эффектом, на 4-10 мес. Это, в свою очередь, позволяет ускорить сроки лечения, снизить затраты на использование неэффективного препарата.15

50422

Ф о

ю15

рмула изобретения Способ определения индивидуальной чувствительности больных ревматоидным артритом к лечению левамизолом путем исследования Т-супрессоров в крови больных, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения за счет снижения побочных явлений и сокращения сроков лечения, исследуют активность спонтанных и индуцированных фитогемагглютинином Т-супрессоров после двух месяцев лечения и при показателях их, близких к норме, определяют организм чувствительным к лечению левамиэолом.