Способ электрофоретического разделения белков Советский патент 1962 года по МПК C07K1/26 

В известных способах электрофорёткческого разделения белков, помещенных в пачку бумажных листов, с целью количественного опрелелення каждой фракции белка, в качестве анализируемого материала используют белковые смеси и растворы, выделенные из тех или иных органоп ;Л1 ткаие .

В предлагаемом способе с целью определения локализации определяемых белков, в качестве анализируелюго материала применяют сьсжии отпечаток среза или плоского органа, впрессованный в фильтровальную бумагу и вкладываемый в пачку. Затем пропускают электрический ток перпендикулярно поверхности -бумажных листов пачки.

осуш.ествлении способа берут большой лист фильтровальной хроматографическо бумаги, расчерчивают ее на квадраты, а. фальцуют гармошкой так, чтобы поперечник сфальцованной стороиь имел фор.му исходного квадрата or 3 до 8 с.п. Несколько таких сложе 1ных бумап объединяют в общую колонку, которую затем спрессовывают при 150-200 агц для лучш-его контакта между слоями.

Полученную колонку смачивают буферным раствором с рН-8.6. Свежий отпечаток листа растсния или другого плоского органа вкладывают в пачку или колонку. Сверху на пачку кладут груз для обеспечения плотного контакта между слоял;и бумаги во вре.мя электрофореза, а загем приводят во взаимодействие е электродами..

На чертеже изображена схема, для осуществления предлагаемого способа.

Колонка / спрессованных бумажных листов помещена в сосуд 2 с буферным раствором, в который опущены электроды 5.

К верхнему слою буманхны.ч листов колонки пр1 соелинены бумажные полоски 4, второй конец которых опущен в сосуд 5 с буферным раствором для электрода 6.

Сверху колонки ноложен груз 7. Колонка и сосуды накрыты стеклянным илн полиэтиленовым колпако г 8.

Свежли сырой отпечаток исследуемого материала, впрессованный в фильтрозальную бумагу, вкладывают в колонку перед электрофорезом, который ведут при напряжении в 10-20 в на см расстояния между электродами. Белки с отпечатка среза двигаются через слои бумаги, в основном по направлению к положительному электроду, оставляя на каждом слое бумаги отпечатки в пределах контура среза.

После окончания электрофореза сложенные в бумажные листы рачвертьтпют. сушат и о; ранп;зают для выявления белков тем или иным стандартным методом.

Локализация белков исследуемого материала устанавливается путем элсктрофореграм:. белков на каждом слое .

Предмет изобретения

Способ электрофоретпческого разделения белков, помещенных i пачку бумажных листов, зажатую между двумя пластинами, смоченную буфериым раствором и приведенную во взан.моденствие с электродами, отличающийся тем, что, с целью определения локализации разделяемы белков, в качестве анализьруемого материала применяют свежий отпечаток среза или плоского органа, впрессованный в срильтровальнзЮ бумагу, который вкладывают в пачку, а электрический ток пропускают перпендикулярно иоверхности буман ных листов пачки.