Способ получения полистирольного латекса для биохимических исследований Советский патент 1989 года по МПК C08F112/08 A61K31/00 A61P3/06 

1

Изобретение относится к химии по- лимеров, а именно к способам получения полистирольного латекса для биохимических исследований, и может быть использовано в медицине для определения холестерина в мембранах :клеток.

Цель изобретения - получение полимеров для регистрации холестерина в мембранах клеток и упрощение.процесса.

Пример 1.- 0,025 г дигитонина растворяют в ЮО.мл воды, затем добавляют 0,34 мл (0,31 г) стиролаС Полимеризацию проводят при непрерьгоном перемешивании и температуре в присутствии радикального инициатора- персульфата калия, взятого в количестве 0,0003 г, в течение 4,5 ч. Конечная конверсия мономера 99,5%. Готовый полимер представляет собой водную дисперсию полимера, которую можно использовать далее в биомеди(Л

цинских исследованиях, с содержание дигитонина 8 мас.%.

П р и м е р 2. 0,025 г Дигитонина растворяют в 100 мл воды, затем добавляют 0,23 мл (0,21 г) стирола. Далее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 в присутствии 0,0001 г персульфата калия. Время полимеризации 4,5 ч. Конечная конверсия 99,8%, содержание дигитонина 12 мас.%. ,

Примерз. 0,025 г дигитонина растворяют в 100 мл воды, затем добавляют 0,55 мл (0,5 г) стирола. Да- лее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 в присутствии 0,0004 г персульфата калия. Время полимеризации 6,0 ч. Конечная конверсия 99,7%. Содержание дигитонина 5 мас.%.

П р и м е р 4 (контрольный). 0,025 г дигитонина растворяют в 100 мл воды, затем добавляют 0,21 мл

«11

ел

00 00

3

(0,19 г) стирола. Далее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 в присутствии 0,0001 г персульфата калия. Время полимеризации 5,0 ч. Конечная конверсия 98,5. Содержаний дигитонина 13 май.%,

П р и м е р 5 (контрольный). 0,025 г .дигитонина растворяют в 100 мл воды, затем добавляют 0,68 мл (0,62 г.) стирола. Далее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 вприсутствии 0,0004 г персульфата калия. Время полимеризации 9 ч. Конечная конверсия 98,0. Содержание дигитонина 4 мас.%.

Свойства.дигитонинсодержащих по- листирольных латексов приведены в таблице.

П р и м е р 6 (использование ди- гитонинсодержащего латекса).

1.3 МП исходного латекса промывают 3 раза десятикратным объемьм дистиллированной воды в фильтрационной ячейке (фильтр Watman, диаметр пор 0,.1 мкм).

2.К 3 мл промытого латекса добаляют 3 мл 0,3 М раствора сахарозы. Латекс готов к использованию.

3.Подготовка клеток к инкубации (эндотелиальные клетки аорты):

а)фрагмент аорты кролика помещают в 2,5%-ный раствор глютарового альдегида, приготовленном на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4), на 12 ч;

б)фрагмент аорты промывают три раза по 15 мин в 0,1 М фосфатном буфере;

в)фрагмент аорты помещают BOjI раствор глицерина на 1 ч;

г)3 раза промывают 0,15 М раствром сахарозы;

д)фрагменты аорты разрезают на два кусочка;

е)один из. кусочков помещают в 0,4%-ный раствор дигитонина, приготовленный на 0,15 М растворе сахарозы, на 1 ч.

4.Оба кусочка аорты (один из ко торьк является контрольньтм) помещаю в приготовленный латекс (см. пп.1 и 2 на 1 ч при 20 С и постоянном встряхивании .

5.Кусочки аорты промьтают в 0,15 М растворе сахарозы три раза, интенсивно встряхивая. Помещают в 1%-ный раствор OSO, приготовленный на 0,1 М фосфатном буфере, на 1,5 ч Затем промывают дважды в дист 1ллиро

0

5

0

5

ванной воде, обезвоживают в этаноле, высушивают методом перехода критической точки в НСР-2, покрьшают в золотом в диодном спуттере Е1КО-1в-3 и исследуют в сканирующем электронном микроскопе Hitachi-570. На контрольном образце, который был обработан раствором дигитонина перед инкубацией с латексом с целью связьшания холестерина мембран, латексных частиц нет. Ъ то же время на препарате, необработанном ДГТ, имеется болътое. количество микросфер.

В среднем с 1 мкм плазматической мембраны эндотелиальной клетки аорты в норме (т.е. в отсутствие гиперхоле- стериноза) связьгаается 5 латексных частиц (5,62 ± 0,84). Таким образом, дигитонин, содержащий латекс, является специфическим маркером на холе- стерин мембран клеток. При экспериментальном атеросклерозе, когда количество холестерина в мембранах клеток значительно увеличено, число латексных частиц, свяэываницихся с 1 мкм поверхности мембраны, возрастает до 10 (10,0 + 1,06). Следовательно, синтезированный дигитонинсодержащий ла- те-кс можно применять для диагностики атеросклероза. Для оценки специфич- : ности связывания латекса с холестерином клеточной мембраны инкубировали дигитонинсодержапще латексы с эндотелием аорты, предварительно обрабо- танньн свободным дигитонином для блокирования имеющегося холестерина и без предварительной обработки. Плотность распределения дигитонинсодержащих микросфер на 1.мкм поверхности эндотелиоцитов в первом случае равна 0,5 + 0,1, во втором - 7,7 t ± 0,5 частиц, что свидетельствует о 5 высокой специфичности связывания ди- гитонинсодержащего латекса маркера с холестерином клеточных мембран.

0

5

0

Формула изобретения

Способ получения полистирольного латекса для биохимических исследоваН НИИ путем эмульсионной полимеризации стирола в присутствии радикального инициатора, поверхностно-активного вещества и биодобавки, от л и ч а - ю щ и и с я тем, что, с целью получения полимеров для регистрации холестерина в мембранах клеток и ynpof

51458360

щения процесса, в качестве биодобав- тинного вещества используют 5-12% ки и одновременно поверхностно-ак- от массы стирола, дигитонина.

..Сройств дягято1ажсод пицш оолистиропышх лжтсксо

Изобретение относится к области химии полимеров и может быть использовано в медицине для определения холестерина в мембранах клеток. Изобретение позволяет непосредственно определять холестерин в мембранах клеток с помощью полистирольного латекса для биохимических исследований, который получают радикальной сополимеризацией стирола с 5-12% от массы стирола дигитонина в водной .среде. 1 табл.

4

(хошт- poai- и)

3

(«в«трол - М)

6

,0М,5 0,01 1,06ОО0. 0. 040

4,0М,0 0,30 t,oeОО0,51,5 tO,0JO

88,00,60 1,070,030,03 0,03t,0 15,00,5