Способ определения вольтарена в биологической жидкости Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения вольтарена в биологических жидкостях или лекарственных формдх.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

К пробе, содержащей вольтарен, прибавляют раствор гидроксида натрия до конечной концентрации 40-160 ммоль/л, раствор феррицианида калия до конечной концентрации 1,25-2,5 ммоль/л, окрашенный продукт фотометрируют в интервале 30-60 мин .при длине волны

450-460 нм. При конечной концентрации гидроксида натрия 40-160 ммоль/л и феррицианида калия 1,25-2,5 ммоль/л, оптическая плотность окрашенного продукта существенно не изменяется в интервале 30-60 мин. При других соотношениях реактивов окрашенный продукт имеет более низкую оптическую плотность либо быстро обесцвечивается.

Зависимость оптической плотности окрашенного продукта от концентрации гидроксида натрия и феррицианида калия в различные промежутки времени после прибавления реактивов приведена в табл. 1.

Таблица 1

Изобретение относится к методам определения вольтарена в биолоа ичес- ких жидкостях. Цель изобретения увеличение чувствительности способа- достигается тем, что определение ведут по цветной реакции вольтарена с феррицианидом калия в щелочной среде,- при этом содержание продукта реакции регистрируют при 430-460 нм через 30-60 мин после добавления реагентов. Чувствительность способа 0,17 мкг в 1мл, коэффициент вариации 1,18%. 4 табл.

1,25 1,25

5,0

,0

20

40

80

160

320

20

40

80

160

320

20

40

80

160

320

20

40

80

160

320

0,020 0,220 0,450 0,590 0,620 0,060 0,410 0,650 0,660 0,590 0,280 0,500 0,630 0,630 0,550 0,480 0,640 0,540 0,500 0,450

Примечание. Конечный объем проб 3 мл, содержание вольтарена

в пробе 20 мкг.

Максимальное поглощение окрашенно- Величина оптической плотности ок- го продукта вольтарена с феррициани- рашенного продукта при различных дом калия в щелочной среде наблюда- длинах волн приведена в табл. 2. «тся при длине волны 450-460 нм.

Т а б л и ц а 2

Примечание. Для исследования взята проба с со- .держанием вольтарена 20 мкг.

0,270 0,540 0,620 0,630 0,470 0,300 0,640 0,650 0,600 0,430 0,500 0,560 0,580 0,560 0,410 0,550 0,620 0,440 0,380 0,275

0,325 0,580 0,610 0,625 0,420 0,330 0,640 0,630 0,560 0,350 0,540 0,550 0,540 0,520 0,330 0,600 0,580 0,420 0,290 0,200

0,440 0,625 0,560 0,520 0,380 0,460 0,640 0,570 0,470 0,260 0,540 0,520 0,470 0,440 0,280 0,520 0,560 0,400 0,240 0,150

0,500 0,630 0,530 0,510 0,280 0,470 0,635 0,525 0,440 0,210 0,540 0,5Г5 0,430 0,400 0,250 0,500 0,540 0,380 0,220 0,090

Сравнение чувствительности предлагаемого способа определения вольта- рена с прототипом (калибровочная кривая для определения вольтарена) дано в табл. 3.

Таблица 3

Определение вольтарена по А.Ф.Фар- тушному (1983, 1984) вели следую1цим образом: к пробе вольтарена прибавляли 3 мл 5%-го раствора перйодата натрия в 75% растворе сернистой кислоты. Окрашенный продукт фотометри- ровали через 15 мин при 550 нм на спектрофотометре.

Как видно из табл. 3, чувствительность предлагаемого способа вьше по сравнению с прототипом более чем в 10 раз.

Воспроизводимость предложенного способа определения вольтарена была изучена при параллельном определении 5 проб, содержащих по 16 мкг вольтарена; коэффициент вариации 1,18%.

Специфичность способа определения вольтарена была проверена на лекарственных препаратах, применение которых совместно с вольтареном наиболее вероятно.

Специфичность способа определения вольтарена приведена в табл. 4.

Таблица 4

Продолжение табл,

.5

Препарат

Количество, мкг Взято I Найдено

Как следует из табл. 4, индомета- цин, амидопирин, зуфиллин, аспирин, анальгин не дают окрашенного продукта в условиях определения.

Пример 1. Определение вольтарена в инъекгшонном препарате.

Инъекционный препарат вольтарена (фирмы Плива, Югославия, в сотрудничестве с фирмой Сиба-Гейги) разводили дистиллированной водой в 100 раз; С,1 мл разведенного раствора вольтарена переносили в другую пробирку, куда прибавляли 2,5 мл 0,1 М раствора

гидроксида натрия и 0,5 мл 15 мМ раствора феррицианида калия. Пробы перемешивали и через 30 мин фотомет- рировали 455 нм в кювете на 1 см, против контроля, содержащего все

реактивы, за исключением вольтарена. Пример 2. Определение вольтарена в биологических жидкостях.

К 1 мл плазмы крови или мочи прибавляли 4 мл 2,5 н.раствора фосфорной

кислоты и 5 мл хлороформа (1:4:5). Пробы перемешивали путем переворачивания (не допуская вспенивания) в течение 15 мин. После расслоения фаз хлороформный слой переносили в другую

пробирку. К остатку прибавляли такое же количество хлороформа и повторяли экстракцию. Объединенные хлороформные экстракты упаривали досуха при 40- 60°С. К сухому экстракту вольтарена

прибавляли 2,5 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия и 0,5 мл 15 мМ раствора феррицианида калия и размешивали. Через 30 мин пробы фотометри- ровали в кювете с длиной светового пути Т см на спектрофотометре при 455 нм, против контроля, который готовили сливанием 2,5 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия и 0,5 мл 15 мМ раствора феррицианида калия.

Расчет вели по калибровочной кривой.

При концентрации вольтарена в плазме крови менее 1 мкг/мл можно использовать микрокюветы, пропорционально, уменьшив количество прибавляемых реактивов или увеличив объемы плазмы или мочи, взятые для экстракции.

Формула изобретения

Способ определения вольтарена в биологической жидкости путем экстракции, добавления к экстракту реагентов с последующей фотометрической регистрацией содержания продукта

цветной реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве реагентов используют гидроокись натрия в концентрации 80- | 160 мноль, феррицианид калия 1,25- 2,5 ммоль, а соде ржание продукта цветной реакции регистрируют через 30-60 мин после добавления реагентов при 450-460 нм.