Способ определения контаминации производственных бактериальных культур Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 

1

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и может быть использовано для определения чистоты бактериальных культур, выращиваемых в производственньк условиях.

Цель изобретения - упрощение способа,

.Пример 1. 20 мл культуры производственного штамма Escherichia coli М-17, выращенного на синтетической среде М-9 с рН 7,3 и ниже,- помещают в ячейку для измерения Eh. Через 10-15 мин в ячейку вводят ацетат натрия до конечной концентрации 15 мМ/л. В чистой культуре наблюдают скачкообразное падение Eh в сторо- 1ну отрицательных значений. В том случае, если культура Е. coli-загрязне-- на посторонней микрофлорой, например, Serratia marcescens, наблюдают отсутствие изменения Eh при добавлении Ацетата натрия на ранних стадиях и возможно повышение Eh на более поздних стадиях загрязнения. Чувствительность способа 100:1 - 1000:1 (т.е. в 100-1000 частях основной культуры выявляют присутствие 1 части посторонней микрофлоры).

Пример 2. 20 мл культуры Bacillus subtilis ВКМ 428, выращенной на синтетической среде М-9 с рН 7,2 и ниже, помещают в ячейку для измерения Eh. В качестве реагента, вызывающего изменения внутриклеточного рН, в ячейку вводят спир

1чЭ СП

товый раствор карбонилцианид-м-хлор- фенилгидразона (З.З-Ю М/л). По отсутствию скачка Eh в область отрицательных значений обнаруживают наличие посторонней микрофлоры в культуре,

П р и м е р ,3, Условия проведения определения аналогичны описанным в примерах 1-2, за исключением того, что к отобранной из ферментера культуре добавляют 20 мМ/л ЭДТА и в качестве агента, вызывающего изменение внутриклеточного рН, используют спиртовый раствор Ш,И -ди- циклогексилкарбодиимида, добавляя его в измерительную ячейку до конечной концентрации 10 М/л, По отсутствию скачка Eh в область отрицательных значений обнаруживают наличие посторонней микрофлоры в культуре.

/

Использование способа упрощает контроль за чистотой культуры в лабораторных и промышленных условиях, сокращает время испытаний, повьшает чувствительность и не требует дорогостоящего оборудования. Б случае использования в качестве реагентов.

изменяющих внутриклеточный рН, слабых проникающих кислот типа ацетата, метод может быть применен непосред- ственно в ферментере в ходе культивирования бактерий.

Формула изобретения

Способ определения контаминации производственных бактериальных культур путем регистрации изменения физического параметра в пробах культур, отличающийся тем,

что, с целью з рощения способа, в исследуемой пробе измеряют исходную величину Eh, затем добавляют вещество, изменяющее внутриклеточный рН, повторно измеряют величину Eh и при

уменьшении ее по сравнению с исходной определяют чистоту культуры, а при отсутствии изменения величины Eh определяют наличие контаминации, 2, Способ поп, I, отличаю щ и и. с я тем, что в качестве ве- щества, изменяющего внутриклеточный рН, используют ацетат натрия, пропионат натрия, М,ш -дициклогек- силкарбодиимид или карбонилцианид-м-хлорфенилгидразон.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для определения чистоты бактериальных культур, выращиваемых в промышленных условиях. Цель изобретения - упрощение способа. Сущность способа сводится к тому, что в отобранной пробе определяют исходную величину EH, затем к пробе добавляют одно из веществ, изменяющих внутриклеточный PH - пропионат или ацетат натрия. N,NЪ - дициклогексилкарбодиимид или карбонилцианид-м-хлорфенилгидразон и повторно регистрируют величину EH. Если величина EH не изменяется, делают вывод о наличии посторонней микрофлоры. При резком уменьшении величины EH по сравнению с исходной делают вывод об отсутствии загрязненности культуры. 1 з.п.ф.