Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 G01N33/577 

Изобретение относится к медицине, частности к гистологической диагностике злокачестпенных опухолей, и может быть использовано э целях уточнения дифференциального гистологического диагноза между доброкачественной и злокачественной природой поражения молочной железы. Изобретение, основано на применении иммуногисто- химического анализа опухолей молочных желез с помощью набора монокло- нальных антител (МКАт).

Цель предлагаемого изобретения состоит в повышении точности дифференциальной диагностики между доброкачественной и злокачественной природой наиболее часто встречающихся опухолей молочной железы.

Способ осуществляется следующим образом.

Каждый из серийных срезов исследуемых образцов опухолей, помещенных

на предметное стекло, окрашивают одним из моноклональных антител (МКАт) против следующих белков промежуточных филаментов: кератина № 8, кератина № 37 или виментина. На окрашенных препаратах сопоставляют локализацию данных белков э одних и тех же гистологических структурах, что позволяет судить о природе опухоли. В способе применяют ПАП-реакцию (пероксидаза - антипероксидаза) или реакцию непрямой иммунофлуоресценции.

Гистологический диагноз ставится на параллельных парафиновых срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, до и независимо от иммуногистохими- ческого исследования, на основании гистологической классификации опухолей молочных желез, предложенной ВОЗ.

Пример К Доставленный в жидком азоте кусочек ткани молочной

сл

с

4

1 1

о

00

vl

железы больной Л,, удаленный при биопсии, заливают-в 7%-ный раствор желатина на забуференном физиологическом растворе (ЗФР). Изготовлены серийные срезы на криотомв| Leitz 2100, которые помещают на предметные стекла. Для исследования берут два стекла (всего 6 срезов).

Гистохимическое исследование методом ПАП. Срезы фиксируют 4%-ным формалином на ЗФР 4 мин, отмывают в трех сменах ЗФР. Проводка по спиртам восходящей крепости от 45° до абсо- лютного, обработка метанолом с 0,3% перекиси водорода 15-13 мин, проводка по спиртам нисходящей крепости, Инкубация с испытуемыми МКАт: на каждый срез наносят по 20 мкг одного из МКАт: против кератина № 17 (клон ЕЗ), против кератина N° 8 (клон HI) или против виментина (клон NT30) и инкубируют при комнатной температуре во влажной камере 30 мин. По Окончании инкубация МКАт тщательно убирают, для чего срезы промывают в трех сменах ЗФР, Инкубация всех срезов с кро--- личьей сывороткой против.мышиных гамма-глобулинов, специфически связы вающИх белки промежуточных филамен- тов. Отмывание в трех сменах ЗФР. Проявление специфического связывания и помощью комплекса пероксидаза-анти- пероксидаза. Промывание в трех сменах ЗФР. Выявление окраски, специфической для пероксндазы, обработка 3-3 - диамино-бензидином-тетрахлоридом (ДАВ) и закрепление 0,5%-ным осмием до 5 мин. Проводка по спиртам восхо- дящей крепости и заключение в канадский бальзам. На одном из стекол срезы докрашивают гематоксилином. Контрольные срезы обрабатывают аналогичным образом за исключением Ни инкубации с испытуемыми МКАт, Вместо МКАт срезы инкубируют с ЗФР, Готовые препараты можно хранить длительное время. Просматривают в просвечивающе микроскопе. Фотографируют на пленку Микрат.

5 0 5

0

5

0

45

50

Положительная реакция с МКАт оценивается. коричневому окрашиванию цитоплазмы.

При микроскопии объекта видно, что пролиферирующие клетки в альвеолах дольки положительно окрашены на кератин № 8, № 17 и виментин. Данное сочетание маркеров свидетельствует о доброкачественной природе пролиферации. Гистологический диагноз, поставленный до и независимо от иммуно- гистохимического исследования: фиб- розно-кистоэная болезнь, дольковая гиперплазия, .

П р и м е р 2. Больная Б. Методика иммуногистохимического исследования аналогична примеру 1.

Видно, что клетки, расположенные в просвете альвеол, окрашены только на кератин № 8 и не окрашены на кератин № 17. Последний выявляется только в клетках, окружающих пролиферат и являющихся остатками предсущество- вавших миоэпителиальных клеток.

По маркерной характеристике картина соответствует раковой опухоли. В данном случае был поставлен гистологический диагноз долькового рака.

Лнсялогичные результаты, как при ПАП-реакции, дает реакция непрямой иммупофлуоресценции. ,

Диагностическая эффективность способа показала, что точность способа возрастав приблизительно на 60%, Формула и к обретения

Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез, включающий нанесение на гистологические срезы специфических антител, отлучающийся тем, что, с целью повышения точности способа, используют моноклональные антитела к белкам промежуточных филаментов - кератина № 8, кератина К 17 и виментина и при наличии трех филаментов определяют доброкачественную опухоль, а при наличии кератина № 8 - злокачественную.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей молочных желез. Цель изобретения повышение точности способа. Цель достигается с помощью моноклональных антител к белкам промежуточных фила- ментов - кератинам № 8, № 57 и к ви- менчину. При наличии в клетках кератинов N° 8, 17 и виментина опухоль диагностируют как доброкачественную, а при наличии кератина № 8 - как злокачеетпенную. Точность способа возрастает на 60%.