Способ получения растений-регенерантов озимой ржи Советский патент 1989 года по МПК C12N5/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к селекции зерновых злаковых культур, и может быть использовано для ускоренного создания новых.

Целый изобретения является увеличение количества фертильных растений и предохранение эксплантата от повреждающего действия стерилизующих агентов.

Способ СОСТОИТ в том, что включает в себя стерилизацию в этаноле, разрезание соцветий на эксплантаты, культивирование эксплантатов на кал- лусогенной среде и регенерацию каллусов на органогенной среде, при этом в качестве органогенной среды исполь зуют среду Иурасиге и Скуга, модифицированную снижением сахарозы до 0,6% и добавлением 1,5-2 мг/л кинетина и 0, индолил-З-уксусной кислоты ;(ИУ1()..,

Причем, с целью предохранения тканей соцветий от повреждающего действия стерилизующих агентов, стерилизуют не .молодое соцветие, а побег, .заключающий в себе, с последующим извлечением молодого соцветия в асептических условиях.

Стерилизация молодых соцветий в 70%-ном этаноле не обеспечивает полного обеззараживания и зачастую при- ;водит к отмиранию поврежденных спиртом тканей.

СО

О1

со ю

Пример 1. У отобранных растений озимой ржи (сорт Дымка) отрезают побеги, содержащие молодые соцветия длиной 2,5-3,5 см, и проводят их стерилизацию. Побеги моют мыльной водой, помещают для обеззараживания на 2 ч в 0,1%-ньй раствор КМпО. и затем на 5 мин в 70%-ный этанол. Молодые соцветия извлекают из побегов и делят на эксплантаты в стерильных условиях (в ламинар боксе). Эксплантаты соцветий, помещенные на каллу- согённую среду,, культивируют в темноте при 25-26°С в течение 30-40 дней.

Полученную каллусогенную ткань переносят на органогенную среду Мура- сиге и Скуга,.модифицированную снижением сахарозы до 0,6%, добавлением 1,5 мг/л кинетина и 0,05 мг/л индо- лил-3-уксусной кислоты для регенерации растений. Через 15-20 дней нается появление растений.

Аналогично вьтолняют остальные примеры, различие состоит в концент- рациях сахарозы, кинетике и ИУК.

Результаты примеров, подтверждающих выбор оптимальной среды для получения регенерантов ржи, сведены в табл. 1 и 2.

Как видно из табл.1 и 2, фертиль- ные растения-регенеранты получены на среде Мурасиге и Скуга, модифицированной снижением сахарозы до 0,6%, добавлением 1,5-2 мг/л кинетина и 0,05 мг/л индолил-3-уксусной кислоты. На контрольной среде Чу-Вонга растения не образовались.

Использование предлагаемого способа регенерации зерновых злаковых

культур in vitro обеспечивает, по сравнению с прототипом, получение большого количества фертильных растений регенерантов озимой ржи (выход регенерантов из каллусов составляет 24,6-30,3%), снижение затрат за счет уменьшения количества сахарозы на приготовление питательных сред, стерелизацию побега, заключающего в себе соцветие, исключает отмирание тканей молодого соцветия, что увеличивает выход каллусной ткани из эксплантатов.

Формула изобретения

1.Способ получения растений-реге нерантов озимой ржи, включающий культивирование стерилизованных в этаноле эксплантатов, полученных из разрезанных соцветий на каллусогенной среде Мурасиге и Скуга, регенера- цию из каллусов фертильных растений на брганогенной среде Мурасиге и Скуга, отличающийся тем, что, с целью увеличения количества фертильных растений-регенерантов, в органогенной среде снижают сахарозу до 0,6% и вносят в нее 1,5-2 мг/л кинетина и 0,05 мг/л индолил-3-уксус- ной кислоты.

2.Способ по п.1, отличающий с я тем, что, с целью предохранения эксплантата от повреждающего действия стерилизующих агентов, стерилизуют побег, заключающий в себе молодое соцветие, с последуюш им извлечением его в асептических условиях.

Таблица 1

Изобретение относится к биотехнологии ,в частности, к селекции зерновых злаковых культур, и может быть использовано для ускоренного создания новых сортов. Целью изобретения является увеличение количества фертильных растений - регенератов. Способ состоит в том, что культивирование осуществляется в два этапа: получают каллус на каллусогенной среде и регенеранты на органогенной среде. Используется среда Мурасиге-Скуга, причем в органогенной среде содержание сахарозы снижено до 0,6% и добавлено 0,05 мг/л ИУК и 1,5-2 мг/л кинетина, 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

0,42

0,52

0,61,5

0,62,0

0,72,0

Чу-Вонга N 6 (известная)

30

13

17

24,6 30,3

47

1,4 2,J 1,5 2,0 1,3 2,0

Таблица 2

17 19 20 16 21 23