Способ получения реагента R @ для тестирования компонента С @ комплемента человека Советский патент 1989 года по МПК A61K35/16 

Изобретение относится к медицинской иммунологии, конкретно к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно реагента R2 и может быть использовано при диагностике аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит и др. для определения комплементарного состояния организма человека. Реагент может быть использован также в лабораторной практике для определения активности компонента С2 комплемента человека при его выделении, очистке и изучении свойств.

Цель изобретения - повышение чувствительности реагента.

За чувствительность реагента принимают то минимальное число эффективных молекул С2 в 1 мкл сыворотки крови, которое определяется с использованием данного реагента Ra.

Эта величина соответствует тангенсу угла наклона прямолинейного графика зависимости Z (число так называемых «эффективных молекул С2 на один сенсибилизированный эритроцит барана) от количества сыворотки в крови (как источника С2) .

Величина Z определяется по формуле г -1п Кл-Кя)/(), где Кл, К и А -- величины оптической плотности супернатал- та после центрифугирования эритроцитов при 412 нм соответственно в контроле на полный лизис эритроцитов, в контроле на реагент и в опыте.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Сыворотку крови человека (пул от 10 доноров) разливают в тонкостенные пробирки по 2 мл и выдерживают в водяном термостате, контролируя температуру (50°С) внутри пробирок. Инактисд

о

00

00

to

нацию проводят 35 мин. Затем пробирки ставят на 5 мин в стакан со льдом для остановки инактивации.

Содержимое пробирок сливают вместе и доводят рН до 6,5, добавляя 0,15 М НС1 и контролируя рН по рН-метру.

Полученный таким образом реагент замо- .раживают при -70°С, либо лиофильно высушивают и хранят при -4°С.

Полученный реагент имел чувствитель- ность 0,856, тогда как известный реагент обладает чувствительностью 0,545+0,081, таким образом чувствительность реагента увеличилась в 1,473±0,137 раза.

Пример 2. Способ осуществляется так же, как и в примере 1, однако рН .сыворотки крови составляет 6,0. Чувствительность реагента при этом составляет 0,856 и превы- 1пает чувствительность известного реагента в 1,568 раза.

Пример 3. Способ осуществляют так же, как в примере 1, однако рН сыворотки крови составляет 7,0. Чувствительность реа

5

гента составляет 0,782, а увеличение чувствительности реагента по сравнению с известным способом его получения составляет 1,432 раза.

Таким образом, чувствительность реа- гента полученного по предлагаемому способу в 1,5 раза выще чувствительности реагента по известному способу, причем значительное увеличение чувствительности реагента достигается за счет простого приема доведения рН до заданного значения.

Формула изобретения

Способ получения реагента R2 для тестирования компонента С2 комплемента человека путем инактивации в сыворотке крови компонента С нагреванием при 50°С в течение 30-40 мин, лиофильным высу- щиванием, отличающийся тем, что, с целью повыщения чувствительности целевого продукта, после нагревания сыворотку крови охлаждают и доводят до рН 6,0-7,0.

Изобретение относится к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно для компонента С₂ комплемента человека, и может быть использовано для диагностики аутоиммунных заболеваний, в лабораторной практике для определения активности С₂ при его выделении, очистке и изучении свойств. Для повышения чувствительности реагента Р₂ сыворотку крови человека после нагревания до температуры 50°С в течение 30-40 мин охлаждают и доводят до рН 6,0-7,0

после чего реагент замораживают при -70°С или лиофильно высушивают и хранят при -4°С.