Способ определения содержания прекалликреина в плазме крови Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам определения в плазме крови компонен - тов протеолитических систем, и может быть использовано в клинико-диагностических лабораториях.

Цель изобретения - повьшение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим образом,

В полиэтиленовую пробирку вносят 0,4 мл. плазмы и монометиламина в конечной концентрации ,27, и оставляют на 1 ч при комнатной температуре, затем эту пробирку помещают в водяную баню при 25°С и вносят 0,4 мл суспензии 1%-ного раствора каолина. После 1-минутного контакта плазмы с каолином отбирают по О,2 мл смеси в пробирки, содержащие 0,4 мл 0,05 М мединалового буфера, рН 7,6, Добавляют 0,2 мл 1%-ного раствора протамин- сульфата и инкубируют пробы 15 мин при 37 С, после чего реакцию останавливают, добавляют 0,8 мл 20%-ной , трихлоруксусной кислоты (ТХУ), В контрольные пробы протаминсульфат вносят после ТХУ, После осаждения не- расщепившегося протаминсульфата ТХУ пробы центрифугируют 20 мин при 8000 об/мин,

В прозрачном центрифугате опреде- ,ляют содержание аргинина по реакции Сакагучи в модификации Храмова и соавторов. Для этого к 1 мл центри- фугата добавляют 1 мл арствора энте- росептола, 1 мл 2,5%-ного раствора NaOH и 1 мл NaBrO, После добавления очередного реактива пробы тщательно перемешивают или встряхивают. Интенсивность окраски определяют на ФЭКе

СЛ

3150

(светофильтр № 5, кювета 10 мм), сравнивая опытную пробу с контрольной

Количетсво аргинина в пробах слу- жит мерой определения активированного прекалликреина.

Активность прекалликреина выражают в микромолях аргинина, отщеплен- . кого от протаминсульфатд 1 л плазмы крови за 1 мин по формуле

л E.Y ilz:§jil2oo

, ,1 74,2

где Р - количество аргинина в пробе, мкг; V - объем инкубированной смеси, мл;

v объем плазмы в пробе, мл; t - время инкубации; М - молекулярная масса аргинина 1000 - пересчет на I мл плазмы.

При расчете уровня прекалликреина учитывают разность между содержанием аргинина в плазме, активированной в течение 1 мин каолином, и неактиви рованной плазме.

Полученные данные приведены в таблице.

Предложенньм способ может быть использован для определения истинного значения прекалликреина при любых заболеваниях, сопровождающихся изменением прекалпикреин-калликре- нновой системы. Формула изобретения

Способ определения содержания прекалликреинав плазме крови, вклю

чающий активацию плазмы каолином, инкубацию активной плазмы с протамин- сульфатом, остановку реакции трихлор- уксусной кислотой и определение содержания калликреина по аргинину, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина -макроглобулина, перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1 ,5-2 ч при комнатной температуре и определяют содержание прекалликреина.

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам определения содержания прекалликреина в плазме крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа определения за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина - α₂ - макроглобулина. Для этого в известном способе перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1,5-2 ч при комнатной температуре. 1 табл.

Составитель Н.Литвиненко Редактор М.Келемеш Техред И.Верес

Заказ 5535/47

Тираж 789

ВНИИПЙ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКИТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Корректор С.Черни

Подписное