Способ определения активности антибиотиков и антисептиков Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и микробиологической промышленности, в частности к производству антибактериальных препаратов.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом .

Культуру штамма ЦМПМ К В-.2945, хранящуюся на косяках с МПА под вазелиновым маслом, высеваю т на чашки с МПА с добавлением 0,5% мелассы либо в колбы с ПМБ и культивируют 18 ч при 55-67°С. Выращенную культуру можно хранить в течение двух недель при

. Для выполнения анализа используют смыв в физиологическом растворе со свежего (ночного) высева на МПА. При этом питательный агар на чашки Петри разливают в два слоя. Первый слой (20 мл стерильного агара) подсушивают при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем разливают второй слой (5 мл агара, содержащего 1 X 10 клеток тест-культуры) при температуре не выше 55 С.

В застывшем агаре делают лун ки диаметром 8 мм и в них закапывают по 0,1 мл растворов стандартных препаратов и испытуемого образца. Чашки

U

3151

инкубируют при 60-65°С в течение t- 6 м, после чего определяют диаметр зон угнетения роста. Расчет проводят по предварительно построенной калибровочной кривой,

Пример 1. Определение баци- трацина в ветеринарном препарате бациллихин 30. Исходный препарат растворяют в физиологическом растворе и готовят серию разведений.

Полученные растворы закапывают в лунки питательного агара, зараженного Bacillus therraononliquefaciens ЦМПМ . Чашки инкубируют 6 ч при 65°Г,, затем определяют диаметр зон задержки роста и рассчитывают концентрацию препарата по калибровочной кривой, построенной при использовании стандартных растворов с концентрацией 5-100 мкг/мл,

П р и м е р 2, Определение баци- трацина в культуральной жидкости.

Куяьтуральную жидкость центрифугируют для отделения клеток продуцента (B.licbeni formis). Центрифугат разводят физиологическим раствором и затем проводят определение по примеру 1

Биологическая активность культуральной жидкости составляет 5200 мкг/ /мл (ю известному способу определено 5250 мкг/мл),

Пример ы 3 подгоговлен- ные чашки закапываю г растворы, Содержащие различные концентрации антибиотиков (канамицина сульфат, тетрацик

27s

лин) или антисептиков (мертиолат, перекись водорода), по 0,1 мл на лунку. После ин кубации чашек при бО С в

течение 6 ч или при 65°С в течение U измеряют диаметры иигибирования зон роста бактерий, после чего с помощью калибровочных кривых определяют концентрацию антибиотика или анти10 септика. Параллельно определяют концентрацию антибиотикоЕ и антисептиков известным способом о Результаты представлены в таблице.

Таким образом, предлагаемый Спо15 соб позволяет уменьшить время, необходимое для определения биологической активности или концентрации антибиоти- ка или антисептика, в 3- раза, без ухудшения точности определения по сравнению с известным способом.

20

Формула изобретения

Способ определения активности антибиотиков и антисептиков методом диф25 фузии в агар, включающий инкубирование исследуемых препаратов в присутствии тест-культуры микроорганизма с использованием агаровой среды с последующим учетом результатов по наличию

30 и размерам зон угнетения роста тест- культуры, отличающийся reMj что, с целью ускорения способа, в качестве тест-культуры используют шгамм термофильных бактерий Bacillus

35 thermononliquefaciens ЦМПМ If а инкубирование проводят при 60- б5°Со

Изобретение относится к медицинской микробиологии и микробиологической промышленности. Цель изобретения - ускорение способа. В способе в качестве тест-культуры микроорганизма используют штамм BACILLUS THERMONONLIQUEYACIENS ЦМПМ NB-2945. Исследуемый образец и культуру разводят в физиологическом растворе. Определение проводят традиционным методом диффузии в агар. Инкубирование посевов осуществляют при температуре 60-65°С и учитывают результаты по зонам угнетения роста тест-культуры через 4-6 ч инкубации. Чувствительность способа на уровне стандартных методов. 1 табл.

Результаты определения концентраций антибиотиков и антисептиков