Способ количественного определения антител к эритроцитам барана Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 G01N33/543 

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано дпя количественного определения антител и антигенов.

Целью, изобретения является упрощение методов и сокращение времени анализа.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве иммуносорбента используют гранулированный аэросил, способный самопроизвольно адсорбировать на своей поверхности эритроциты барина при оптимальных условиях адсорбции. При этом антитела, содержащиеся в исследуемом растворе, соединяются с этим иммобилизованным антигеном. Количество, антител определяют по раз-

ности между количеством белка в комплексе антиген-антител и антигеном, адсорбировавшемся на гранулированном аэросиле с учетом неспецифической сорбции.

П р и м е. р. В качестве сорбента используют гранулированный аэросил, полученный КЗ аэросила А-300. Гранулы Аэросилогель, представляющие собой сферические образования диаметром около 2 мм с плотностью 200-230 г/л, размером пор 400-600 А, удельной поверхностью 150 .

Эритроциты барана .разводят физиологическим раствором и добавляли в ряд пробирок с гранулированным аэросилом, инкубируют в течение 1 ч. Затем трехкратно отмывают дистиллировансд

со

4

О

00

31513

ной водой для удаления гемоглобина, который мешает количественному определению белка. При отмывании дистиллированной водой эритроциты лопаются, г вмоглобин выходит из них в раствор. При этом эритроциты барана и частицы гранулированного аэросила обесцвечиваются, что указывает на освобождений адсорбировавшихся эритроцитов от гемо глобина,

0,2 МП 25%-ного раствора эритроцитов барана добавляют в ряд пробирок, содержащих навеску по 10 мг гранулированного аэросила в каждой, инкубиру н)т при рН 4,5-7,0. Далее определяют количество адсорбированных эритроцитов биуретовым методом, после десорбции их 6%-нын раствором NaOH.

Затем добавляют OjS мл. исследуе- мой сыворотки к готовому аэросилу с адсорбированными к его поверхности эритроцитами барана.

Для снижения неспецифической сорбции исследуемую сыворотку разводят в 20 раз. Инкубируют в течение 60 мин и отмывают.

Количество антител определяют по разнице между количеством белка в пробирках, содержащих комплекс антиген- антитело, и количеством белка в пробирках с адсорбированным антигеном.

Предложен простой метод количественного определения антител к эритро- тдитам барана с помощью гранулирован- ного аэросила. Упрощение метода по

сравнению с известным заключается в том, что в качестве иммуносорбента используют гранулированный аэросил, который самопроизвольно и прочно адг сорбирует антиген - эритроциты барана Причем, за исключением фотометрирова- кия, анализ осуществляют в одной пробирке, что.исютючает перенос реагентов из одной пробирки в другую с неизбежными при этом потерями.

Метод не требует центрифугирования, которое отнимает много времени и потому весьма прост в исполнении.

Для определения антител к эритро- 1;гитам барана с помощью предлагаемого способа затрачивается 1 ч, в.то время как по известному способа затричива- ется 24 ч,

Формула изобретения

Способ количественного определения антител к эритроцитам барана, включающий адсорбцию антигена на твердой подложке, инкубацию исследуемой сыворотки с образованием комплекса антиген-антитело, десорбцию комплекса и антигена с последующим отделением количества белка по разнице между количеством белка в комплексе антиген-антитело и адсорбированным анти- геном отличающийся тем, что, с целью сокращения времени анализа и упрощения способа, в качестве твердой подложки используют аэросип.

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для количественного определения антител. Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа. Гранулированный аэросил обрабатывают эритроцитами барана, инкубируют с исследуемой сывороткой и затем десорбируют белок с поверхности аэросила. Затем определяют концентрацию белка, а количество специфических антител определяют по разнице между количеством белка в комплексе антиген-антитело и количеством белка сорбированных эритроцитов барана. По сравнению с прототипом время определения количества противоэритроцитарных антител сокращается на 23 ч, а также упрощается процедура анализа за счет исключения процедуры центрифугирования.