Способ выделения возбудителя бруцеллеза вида BRUceLLa меLIтеNSIS из патологического материала Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 C12N1/00 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения возбудителя бруцеллеза вида melitensis из индивидуальных проб малока и внутренних органрв абортированных плодов.

Цель изобретения - увеличение накопления бактериальной массы за счет повьшения селективности.

Пример 1. Среду готовят следующим образом.

В приготовленный по общепринятой ре- цептуре печеночный глюкозо-глицериновый агар или эритрит-агар сухой серийного производства, проверенные референтными штаммами бруцелл и пригодные по своим качествам, вносят один из трех вариантов селективной добавки. Ингредиенты селективной добавки в растворенном виде в физиологическом растворе или дистиллированной воде вносят при перемешивании в расплавленный и остуженный до 45л50°С агар при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Оксициллина натриевая соль 0,05 Полимиксина М сульфат, ед 50000. Невиграмона0,025

или

Полимиксина Мсульфат,ед 50000 Метициллина натриевая соль 0,25 Кристаллвиолет0.0013-

0,0017

(или в разведении 1:600000- 1:800000)

или

Оксациллина натриевая соль 0,05 Полимиксина М сульфат, ед 50000 Кристаллвколет шш генци-|.- анвиолет 0,00130,0017 (или в разведении 1:600000- 1:800000).

Индивидуальные пробы из свежевыделенного молока о:ввц или другого дойного животного берут в объеме 4-5 мл. При невозможности высева непосредственно после доставки высев молока проводят через 16-18 ч при хранении молока при 4®С. Материал засе

J

вают на Отдельные чашки Петри или про бирки (косяк) с селективной средой пипеткой в объеме 0,1 мл. Органы абор- тировайных плодов засевают методом отпечатка среза на отдельные чашки Петри или пробирки со скошенным селективным агаром. Взвесь органов или содержимое желудка засевают в .объеме 0,1 мл в отдельные чашки Петри или

пробирки со скошенным селективным агаром.

Посевы инкубируют при в течение 7-12 сут с ежедневным контролем роста после двусуточной инкубации, Возбудитель бруцеллеза на селективных питательных средах обычно вырастает в течение 3-7 сут. i

Бруцеллы вырастают на селективной среде в виде колоний с ровными краями, выпугахые, прозрачные с голубова- тьт оттенком (при добавлении краски) 55 и гладкой поверхностью, гомогенны, иногда с нежной зернистостью в центре колонии. С возрастом нежные и прозд

,5

0

5 0

5

0

45

5 рачные колонии бруцелл постепенно теряют голубизну и мутнеют. Колонии бруцелл по размеру и темпу роста несколько отстают по сравнению сростом на общепринятых плотных питательных ере- дах. При хранении культур на селективной среде до 1-1,5 мес признаков диссоциации не отмечается.

Испытано 2488 индивидуальных проб овечьего молока и выделен 41 штамм Вг. raelitensis. Из них 1552 пробы были доставлены из благополучных по бруцеллезу овцеводческих хозяйств и вьщелены 25 штаммов бруцелл вида melitensis.На контрольной среде, т.е. общепринятой печеночной глюкозо-гли- цериновой среде, выделен только один штамм Br.melitensis.

Из 126 исследованных внутренних органов абортированного плода мелкого рогатого скота на селективной среде вьщелены 76 штаммов Bruc.ella meliten- sis , на контрольной ср еде - только 63 штамма бруцелл. От четырех абортированных плодов крупного рогатого скота выделена одна культура Brucella abortus ,а от пяти абортированных плодов свиней бруцеллы не выделены, j На предлагаемых.селективных питательных средах дополнительно выделены 14 штаммов бруцеллеза (18.,4%). Сравнительные данные приведены в таблице.

Результаты бактериологического исследования молока овец и внутренних органов абортированных плодов мелкого рогатого скота приведены в таблице.

На предлагаемых селективных пнта- т дтьных средах формируются колонии возбудителя бруцеллёза из малых посевных доз. Применение антибиотиков отечественного производства в качестве селективного фактора без изменения технологии выделения бруцелл в значи- тельной степени увеличивает возможность лабораторной службы.

Приготовление предлагаемых селективных сред не представляет трудностей и не требует специальной подготовки практических работников.

Внесение селективных добавок в значительной степени экономит среды и сокращает время исследования.

Формула изобретения Способ выделения возбудителя бруцеллеза вида Brucella melitensis из патологического материала, включающий посев исследуемого материала на питательную среду , содержащую печеночно- глицериновый или эритрит-агар и селек- тквную добавку, культивирование с последующим выделением чистой культуры, отличающийся тем, что, с целью увеличения нако-пления бактериальной массы, в качестве селективной добавки используют смесь полимиксина М сульфата, оксициллина натриевой соли и невиграмона при следующем соотношении компонентов, г/л: Оксацшшина натриевая соль0,025-0,1

Полимиксина Мсульфат,

ед25000-100000

Невиграмон0,0125-0,05

или смесь полимексина М сульфата, ме- тициллина натриевой соли и кристалл

виолета при следующем соотношении компонентов, г/л:

Полимиксина М сульфат,

ед25000-100000

Метициллина натриевая

соль0,125-0,5

Крйсталлвиолет 0,0013-0,0017 или смесь оксациллина натриевой соли, полимиксина М сульфата и/или кристалл- виолета и генцианвиолета при следующем соотношении компонентов, г/л:

Оксициллина натриевая

соль0,025-0,1

Полимиксина М сульфат,

Д2500-100000

Крйсталлвиолет или

генцианвиолет 1,0013-0,0017

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения возбудителя бруцеллеза вида MELITENSIS из загрязненных посевов. Целью изобретения является увеличение накопления бактериальной массы за счет повышения селективности. В приготовленный по общепринятой рецептуре печеночный глюкозо-глицериновый агар или эритрит-агар сухой серийного производства вносят один из трех вариантов селективной добавки, ингредиенты селективной добавки вносят при следующем соотношении компонентов, г/л: оксациллина натриевая соль 0,025-0,1

полимиксина М сульфат 25000-100000 ед

невиграмон 0,0125-0,05, или вносят полимиксина М сульфат 25000-100000 ед

метициллина натриевая соль 0,125-0,5

кристаллвиолет 0,0013-0,0017, или вносят полимиксина М сульфат 25000-100000 ед

оксациллина натриевая соль 0,025-0,1

кристаллвиолет (или геницианвиолет) 0,0013-0,0017. На предложенных средах формируются колонии возбудителя бруцеллеза из малых посевных доз. Применение антибиотиков отечественного производства в качестве селективного фактора без изменения технологии выделения бруцелл увеличивает возможности лабораторной службы. Применение селективных сред исключает необходимость засева исследуемого материала на большое количество косяков с последующими пересевами для очистки возбудителя BR.MELITENSIS от обильной посторонней микрофлоры. 1 табл.

Молоко из благополучных хозяйств Молоко из неблагополучных хозяйств Внутренние органы абортплодов:

мелкого роГОТОго

скота

крупный рогатый

скот

2524 25 ,25

1616 1616

3318 4176

1111