Способ определения содержания глюкозы в биологических жидкостях Советский патент 1989 года по МПК G01N33/66 

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, к способам определения содержания глюкозы в биологических жидкостях.

Цель изобретения - повьшение чувствительности.

На чертеже представлена зависи- - мость средних значений интенсивности хемилюминесценции от количества глюкозы в интервале 0,5-40 мкг субстрата (по оси ординат - log интенсивности люминесценции, по оси абсцисс - log концентрации глюкозы в интервале 0,5-40 мкг) .

Цель достигается тем, что в качестве индикатора в глюкооксидазную систему добавляют люминол в концентрации 1 0 М, а полученный раствор исследуют методом хемилюминомет- рии.

Способ осуществляют следующим образом .

С целью определения содержания глюкозы в биологических жидкостях готовят следующий раствор.

Глюкооксидазная система - трис- . буфер 36,6 г, 56,6 г растворить в 50 мл воды, профильтровать, проверить рН (7,0), добавить 400 мл глицерина и до 1 л, затем растворить 600 мг глюкооксидазы и 50 мг пе- роксидазы хрена (раствор хранится при 4°С в течение полугода).

Водный раствор люминола 1,5-10 М -265,5 мг люминола на 1 л воды (хранится в темноте при 4°С в течение месяца) .

При определении количества глюкозы в моче берут О, 1 мл мочи, добав- . ляют 0,4 мл физраствора, полученный раствор сначала нагревают до 90 С, охлаждают и к нему добавляют 1 мл глюкооксидазной системы, а затем добавляют 100 мкл 1,5-10 М раствора люминола (до концентрации 10 М). Проводят инкубацию пробы в хемилюми- нометре при 37 С и определяют интенсивность хеми;шминесценции раствора в течение 10 мин. (пиковое значение

S

(Л

определяют примерно на третьей минуте) . При определении концентрации глюкозы используют калибровочную прямую построенную в двойных логарифмических координатах по стандартным растворам глюкозы, выражагацую зависимость интенсивности хемилзоминесценции от концентрации глюкозы (чертеж),

При определении глюкозы к О,1 мл крови добавляют 0,4 мл физраствора, нагревают до 90°С, после охлаждения к пробе добавляют 1 мл оксидазной системы и 50 мкл раствора люминола до концентрации , Дальнейшее определение проводится также, как описано,

При определении концентрации глюкозы в среде инкубации клеток отбирают О,1 мл среды, добавляют р,4 мл физраствора, 1 мл глюкооксидазной системы и стандартный раствор люминола до концентрации . Дальнейшие операции как описано,

Зависимость средних значений мак- симумов интенсивности хемилюминесцен- ,ции от количества глюкозы в пробе в

интервале 0,5-АО мкг субстрата приведена на чертеже, она используется как калибровочная при определении глюкозы в исследуемых образцах. Чувствительность определения - 0,5 мкг в пробе. Для сравнения чувствительность метода-Л .Лойда, принятого за прототип, ,5 мкг в пробе.

Формула изобретения

Способ определения содержания глюкозы в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе ферментной системы, содержащей глюкоокси- дазу, пероксидазу, буфер, .глицерин и индикаторное вещество с последующей регистрацией продукта реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, в качестве индикаторного вещества ис-. пользуют люминол в концентрации 10 -2.10 М, регистрацию проводят измерением хемолюминесценции, а объемное соотношение компонентов в смеси проба: ферментная система: индикаторное вещество составляет О,т:,0:О,02-0,I.

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения содержания глюкозы в биологических жидкостях. Способ осуществляется путем добавления к пробе ферментной системы, содержащий глюкооксидазу, пероксидазу, буфер, глицерин и индикаторное вещество, причем соотношение пробы, ферментной системы и индикаторного вещества составляет 0,5:1,0:0,02-0,1 по объему. В качестве индикаторного вещества используют люминол в концентрации 10^-4-2^.10^-5 М, а определение глюкозы проводят по интенсивности хемолюминесценции.

18 IffS (Wmz)