Способ получения липополисахарида менингококков серогруппы А Советский патент 1990 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к медицине, в частности к получению биологически активных микробных антигенов,используемых в диагностике и лечения инфекционного менингита, и касается выделения иммунохимически чистого липополисахарида (ЛПС) менингококка.

Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта

Поставленная цель достигается тем, что препарат липополисахарида, полученный в результате водно-фенольной экстракции по Вестфалю, подвергают термостатированию в течение нескольких суток с последующим ультрацентрифугированием.

Способ осуществляется следующим образом.

20 г высушенных ацетоном микробных клеток штамм А-208 суспендируют в 700 мл дистиллированной воды с температурой 65 - 68°С, добавляют к суспензии 700 мл 90%-ного фенола,предварительно нагретого до той же температуры. Смесь выдерживают на водяной бане 165 - 68°С в течение 30 мин при перемешивании, а затем охлаждают до 5-10°С и центрифугируют. Верхний водный слой отсасывают, а нижний феноль- ный вновь перемешивают с 600 мл воды при 68°С в течение 10 мин. Смесь охлаждают и центрифугируют. Водный слой отделяют от фенольного и объединяют с первой порцией. Полученный раствор диализуют против дистиллированной воды и лиофилизируют. Выход сырого липополисахарида составляет 1,0 - 1,4 г. 1 г сырого липополисахарида растворяют в 200 мл воды, добавляют в качестве консерванта 1% (2,0 мл) толуола. Флакон с раствором липополисахарида плотно закрывают и помещают в термостат при 37 С на 16 сут для разрушения полисахарида.

добавляют NaCl до концентрации 0,5М и раствор центрифугируют при 105000g в течение 2-х ч. Супер- натант удаляют, а осадок липополиса- харида ресуспендируют в исходном объеме дистиллированной воды. Повто- ряют центрифугированием при том же режиме. Супернатант отбрасывают, а осадок лиофилизируют.

Предлагаемый способ позволяет получать препараты менингококковых ЛПС, свободные от примеси группоспе- цнфического полисахарида и с низким содержанием белка и нуклеиновых кислот. Липополисахарид, полученный по п едложенному методу, является биологически и иммунологически активным препаратом и может быть использован

при проведении различных иммунологических исследований.

Формула изобретения

Способ получения липополисахарида менингококков серогруппы А путем экстрагирования микробных клеток

смесью фенол-вода с последующим

ультрацентрифугированием водной части смеси, содержащей липополисахарид, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого

продукта, перед ультрацентрифугированием проводят инкубирование водной части смеси при 35-39°С в течение 13-20 сут, а ультрацентрифугирование осуществляют в растворе солей с ион Ной силой, равной 0,-3-0,6,

Изобретение относится к медицине, в частности к получению липополисахаридов из менингококков. Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта. Для этого водный раствор, содержащий липополисахарид, полученный в результате водно-фенольной экстракции менингококков по методу Вестфаля, перед ультрацентрифугированием инкубируют при 35 - 39°С в течение 13 - 20 суток, а ультрацентрифугирование экстрагированного липополисахарида осуществляют в растворе солей с ионной силой, равной 0,3 - 0,6.

Редактор Г.Гербер

Составитель 00 Кононова Техред Л.Олийнык

Заказ 124

Тираж 527

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Корректор И.Муска

Подписное