Способ получения растений-регенерантов риса Советский патент 1990 года по МПК C12N5/00 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для получения новых исходных форм риса методом культуры изолированных тканей.

Практическая значимость метода культуры тканей для селекции тем выше, чем больше выход из каллуса растений-регёнерантов и чем выше процент их приживаемости после пересадки в почву.

Цель изобретения - увеличение выхода укорененных регенерантов и повышение их приживаемости в грунте.

Способ состоит в том, что при получении растений-регенерантов, заключающемся в получении из эксплантатов первичного каллуса, субкультивировании его, переносе на регенера- ционную среду и последующем доращи- вании на безгормональной среде, стеблевые регенеранты и каллусы со стеб- левыми почками перед переносом на безгормональную среду обрабатывают раствором ауксина.

Пример 1. Получение растений-регенерантов из каллуса различных сортов риса. Каллусы получают из различных эксплантатов (целые семена, зародыши зрелых и молодых семян, отдельные части зародышей или прорастающих семян, зачаточные метелки) на индукционной среде Мурасиге и Скуга (МС) с добавкой 4 мг/л 2,4Д + агар И Полученные каллусы субкультивируют на той же среде, но с уменьшенным содержанием 2,4Д (2 мг/л) в течение нескольких (до 10) пассажей продолжительностью по 20-30 сут, высаживая часть каллусов по окончании каждого пассажа на регенерационную среду МС с цитокинином 6-БАП (5 мг/л). Через 20-30 сут культивирования каллусов на этой среде в них образуются зеленые почки, часть из которых в дальСЛ

ю

сп to

315412524

иейшем развиваются в проростки, априведены результаты культивирования

часть прекращают развитие. В табл. 1каллусов на регенерационной среде.

Таблица 1

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, и может использоваться в селекции растений. Целью изобретения является повышение приживаемости регенераторов в почве и увеличение выхода укорененных растений. Способ состоит в том, что растения-регенеранты после регенерационной среды перед доращиванием на безгормональной среде обрабатывают раствором ауксина. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

Высажеко каллусов, шт. 67 83 378 Получено (шт./10 каллусов)

5,1

5,6

Количество каллусов показано числом трансплантатов величиной 2-3 мм, являющихся единицей пересаживаемого материала.

Как видно из табл. 1, число получаемых неукорененных проростков и стеблевых почек значительно выше, чем регенерантов с корнями. При это14 добавка в среду ауксина ИУК, 10 мг/л не способствует увеличению корнеобрар зования у регенерантов. Образовавшиеся на регенерационной среде нормальные проростки переносят в почву, а стеблевые регенеранты и каллусы со стеблевыми почками, прекратившие раз- витие, извлекают из пробирок или колб, разделяют на отдельные проростки, а каллусы - на кусочки величиной 2-3 мм, после чего проводят их обработку ауксином с(-НУК в концентрации 10 мг/л. Каллусы с почками, а также проростки высотой, не превышающей 1 см, помещают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, смоченную раствором ауксина ЫгНУК (слой не более 1 мм). Чашки закрывают и оставляют в стерильном боксе при комнатной температуре на 1-2 ч. Это время необходимо и достаточно для проникнове

350

350

4,6

1,3

1,0

5

0

д5

50

5

ния раствора в клетки тканей трансплантатов. Проростки высотой более 1 см помещают в пробирки с раствором ауксина, высаживая их на мостики из фильтровальной бумаги так, чтобы обработке подвергалась лишь нижняя часть проростка. По истечении указанного времени трансплантаты переносят на безгормональную среду, не промывая их от ауксина. В контрольном варианте трансплантаты пересаживают на безгормональную среду для доращивания, не обрабатывая их ауксином. Все работы проводят с соблюдением обычных правил асептики, принятых в работах с культурами тканей.

.

Примеры 2-4 осуществляются аналогично примеру 1, отличие состоит в использовании другой концентрации ауксина о(-НУК, а также используют ауксин КУК в двух концентрациях. Результаты пересадки регенерантов на безгормональную среду с предварительной обработкой их ауксином (сорт ри51

са ВНИИР 7405, 1986-1987 г.) приведены в табл. 2.

Как видно из табл0 2, обработка регенерантов ауксинами резко повышает выход укорененных растений„ При этом лучший результат получен при ис пользовании of-НУК в концентрации 100 мг/л. Выход укорененных растений более 100% по отношению к числу пересаженных трансплантатов объясняется тем, что часть стеблевых регенерантов имеют по несколько почек рос та, после укоренения они начинают расти и дают по несколько отдельных растений о

Таблица 2

Обработка ауксином о(-НУК способствует образованию у проростков мощной корневой системы, что обеспечивает хорошую приживаемость их после пересадки в почву, показанную в табл. 3.

Таблица 3

10

25

30

35

40

Формула изобретения

2. Способ по п. 1, отличающий с я тем, что используют ауксины - индолил-3-уксусную кислоту и о -нафтил уксусную кислоту.