Способ размножения гречихи IN VIтRо Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений, в частности для ускоренного размножения ценных экземпляров и сортов гречихи, а также в исследованиях по генетике и физиологии растений.

Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса размножения при увеличении выхода регенерантов.

Способ состоит в том, что в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование их осуществляют на одной и той же модифицированной питательной среде Гамборга Bs с 6-бензиламинолурином (6-БАП) из расчета 5-10 мг/л среды, при последующих субкультивированиях концентрацию б-БАП уменьшают до 1-2 мг/л.

Способ осуществляют следующим образом.

Из донорных стерильных или простери- лизованных растений гречихи вычленяют узел с частью стебля и листом (1,5-2 см). Затем узлы растений культивируют на модифицированной питательной среде Гамборга Bs, содержащей 5-10 мг/л б-БАП. Эта величина получена экспериментальным путем. При уменьшении количества б-БАП в питательной среде процесс размножения идет менее интенсивно и при больших затратах времени, хотя при последующих субкультивированиях концентрацию уменьшают до 1-2 мг/л.

Состав среды для культивирования и субкультивирования узлов растений гречихи следующий, мг/л: Макросоли

NaH2P02 Н20150

KN032500

(NH4feS04134

MgS04 -7Н20250

CaCl2 -2Н20150

FeS04 -7H2028

№2ЭДТА 2Н2037,3

Микросоли

НзВОз3

MnS04 -4Н2010

СоС(2 6Н200,025

Ё

О

сл

00

о ю

00

-Л °|

//.l.v

CI

ислота

зеина

0,025

2

0,25

0,75

2 1 1

100 2000 30000 7000 5-10 Остальное

Перед автоклавированием рН среды доводят до 5,8-6,0.

Материал инкубируют вусловиях 16-часового фотопериода при освещении 7000 лк и температуре 24 ±2°С в закрытых прозрачных сосудах, В случае появления на эксплантатах бактериальной или грибной инфекции их удаляют с частью прилегающей к ним питательной среды,

Эксплантаты находятся на питательной среде 3-4 нед. К концу этого периода из пазух листьев образуется 3-8 проростков до 2-5 см длиной, узел и нижняя часть стебля утолщаются, на нижней части стебля образуется каллус. Размножившиеся из пазух листьев регенеранты рассаживают на ага- ризованную, разбавленную вдвое питательную среду Мурасиге и Скуга без гормонов для доращивания и укоренения. Корни начинают образовываться приблизи тепьно на 10-й день, а выращивание растений на данной среде продолжают 3-4 нед. после чего их переносят в почвенно-торфя- ную смесь.

Оставшуюся часть эксплантата разрезают на 2-3 части, отдельные кусочки пересаживают на исходную среду для регенерации и культивируют в указанных условиях. При этом в течение 3-4 нед объем этих кусочков увеличивается и образуются стеблевые почки, кучки проростков до 3-10 мм длиной, отдельные листья на черешках. После чего эксплантаты расчленяют на отдельные регенеранты и клоны почек и высаживают на среду Мурасиге и Скуга с половинной дозой ее компонентов, но без гормонов, для доращивания и укоренения. Подобное дробление эксплантатов со стеблевыми почками и попеременное культивирование на среде регенерации и на среде для доращивания и укоренения можно проводить несколько раз, что в случае необходимости увеличивает количество получаемых растений-регенерантов от одного эксплантата.

П р и м е р 1. В работе исследуется применение способа для сортов гречихи культурной Казанская групнозерная и Майская, Работа осуществляется по указанной методике, при этом в среду Гамборга Bs вводят 6-БАП в количестве 1 мг/л.

Пример 2-4. Осуществляют аналогично примеру 1, результаты представлены в таблице.

0 Таким образом, наибольший выход ре- генерантов наблюдается при использовании 6-БАП в концентрации 5-10 мг/л. Следует отметить, что инициация развития проростков при этих концентрация 6-БАП

5 начиналась на неделю раньше. Эти побеги отделяют и рассаживают на агаризованную разбавленную среду Мурасиге и Скуга без гормонов .для доращивания и укоренения. При тех же температурных условиях и фото0 периоде выращивание на данной среде продолжают 3-4 нед , после чего их можно высаживать в почвенно-торфяную смесь.

Оставшуюся часть эксплантата разрезают на части и отдельные кусочки опять

5 помещают на исходи/ю среду для регенерации и культивирования в названных условиях. При этом за 3-4 нед. размеры этих кусочков увеличиваются, образуя конгломераты проростков разных размеров, стебле0 вые почки, отдельные листья на черешках. Затем опять повторяют операцию отделения регенерантов от клонов почек с недоразвитыми проростками. Регенерационная способность эксплантатов сохраняется в

5 течение длительного времени (часть эксплантатов культивируется уже около года), однако через 3-4 субкультивирования на среде для регенерации наблюдают появление морфозов, которые нарастают от пас0 сажа к пассажу, особенно на среде с содержанием 6-БАП 10 мг/л Предотвратить появление морфозов возможно путем снижения количества 6-БАП в среде для регенерации (до 1 -2 мг/л) при последующих

5 субкультивированиях

Таким образом, используя при последующих субкультивированиях пониженные концентрации 6-бензиламинопурина в среде для регенерации можно получить боль0 шое количество регенерантов от одного эксплантата.

Формула изобретения 1. Способ размножения гречихи In vitro, включающий вычленение эксплантатов,

5 культивирование и субкультивирование их на модифицированной агаризованной питательной среде Гамборга ВБ с последующим доращивэнием и укоренением стеблевых почек и побегов на безгормональной среде Мурасиге - Скуга с уменьшенным вдвое содержанием компонентов, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса размножения, в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование осуществляют на одной и

той же среде, в которую дополнительно вносят 6-БАП в количестве 5-10 мг/л.

2, Способ по п. 1,отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода регене- рантов, после 3-4 пассажей проводят снижение количества 6-БАП до 1-2 мг/л.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений для ускоренного размножения ценных генотипов гречихи. Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса размножения при увеличении выхода регенерантов. Способ состоит в том, что в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование осуществляют на одной и той же модифицированной питательной среде Гамборга Bs, в которую дополнительно вносят 6-БАП в количестве 5-10 мг/л. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Влияние различных концентраций 6-БАП на морфогенез гречихи