Способ получения растений-регенерантов риса Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 C12N5/04 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для расширения генетической изменчивости форм, в частности риса методом культуры тканей.

Цель изобретения - увеличение выхода жизнеспособных регенерантов.

Способ состоит в том, что при получении из эксплантатов первичного каллуса, субкультивировании его, обработке каллуса мутагеном М-нитрозо-М-метилмочевиной, переносе на регенерационную среду, дора- щивании на безгормональной среде и последующей пересадке растений в грунт, каллусы перед переносом на регенеративную среду обрабатывают смесью мутагена и репарогена, а именно: п-аминобензойной кислотой (ПАБК) с концентрации 0,005- 0,05% вес.

Пример1.В качестве эксплантата для индукции каллуса используют зрелые семена. Семена шелушат, стерилизуют сулемой 0,1 % 10 мин, замачивают на 16 ч в автокла- вированной дистиллированной воде, после чего высаживают на поверхность агаризованной среды на 1 шт в пробирку в 5 мл среды. В качестве индукционной среды используют среду Мурасиге-Скуга (МС) + 4 мг/л 2,4 (Д) (0-пассаж). Полученный каллус пересаживают на субкультивационную среду МС + 2 мг/л 2,4 Д (1 пассаж), продолжительность пассажа 20 сут.

В конце 1 пассажа каллусы обрабатывают раствором МММ 0,1%, который готовят на основе среды МС. Обработку каллусов этим раствором проводят на встряхивателе (100 об/мин), в течение часа. После обработки мутагеном каллусы промывают жидкой средой МС.

После этого каллусы пересаживают на регенерационную среду МС + 5 мг/л БАП. Полученные регенеранты доращивают на безгормональной среде МС. Растения, полученные на безгормональной среде, пересаживают в грунт.

Выход нормальных укорененных проростков определяют в расчете на 100 каллусов, пересаженных на регенерационную среду.

П р и м е р 2. Условия проведения опыта аналогичны описанным выше, но перед пел

Ё

О

сь ел ю

00

реносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ 0,1% и репарогена- ПАБК 0,001%.П р и м е р 3. Условия проведения опыта аналогичны описанным выше, но перед пе- реносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ 6,1% и репарогена ПАБК 0,005%.

П р и м е р 4. Условия проведения опыта Аналогичны описанным аыше, но перед пе- эеносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ 0,1 % и реларогена ПАБК 0,01 %.

П р и м е р 5. Условия проведения опыта Аналогичны описанным выше, но перед пе- реносом каллуса на регенерациочную среду Их обрабатывают смесью мутагена НММ 0,1 % и репарогена ПАБК 0,05%.

П р и м е р 6. Условия проведения опыта аналогичны описанным выше, но перед пе- реносом каллуса не регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ 3,1 % и репарогена ПАБК 0,1 %.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице.

Как видно из таблицы, обработка каллусов перед пересадкой на регенерационную

среду смесью НММ и ПАБК повышает выход растений-регенерантов. Лучшие результаты получены в примерах 3, 4, 5; примеры 2, б дают низкие результаты. В сравнении с известным способом выход регенерантов уве- личивается в 8,4 раза, что ведет к увеличению выхода генетически измененных форм, которые являются новым исходным материалом для селекции. Формула изобретения Способ получения растений-регенерантов риса, включающий посадку эксплантатов на модифицированную питательную среду Мураисге-Скуга до образования инициального каллуса, субкультивирование его, обработку каллуса мутагенсм-Ы-нитро- зо-М-металмочевиной, перенос на регенерационную среду, доращивание на безгормональной среде и последующую пересадку растений в грунт, отличающий- с я тем, что, с целью увеличения выхода жизнеспособных регенерантов, перед переносом на регенерационную среду каллус обрабатывают смесью мутагена и репарогена, при этом в качестве репарогена используют п-аминобензойную кислоту в концентрации 0.01-0,1%.

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения новых исходных форм для селекции риса методом культивирования изолированных тканей в сочетании с мутогенным воздействием. Целью изобретения является увеличение выхода жизнеспособных регенерантов. Способ состоит в том, что при культивировании тканей перед переносом на регенерационную среду каллусы обрабатывают смесью мутагена (N-нитрозо-N-метилмочевины) и репарогена (п-аминобензойной кислоты в концентрации 0,01 - 0,1%). 1 табл.

Результаты обработки каллусов смесью мутагена и репарогена перед пересадкой на регенерационную среду