Штамм бактерий SтRертососсUS LастIS - продуцент низина Советский патент 1990 года по МПК C12P21/00 C12N1/20 

1

(21)4357887/31-13

(22)04.01.88

(46) 23.03.90. Бюл. № II

(71)МГУ им. М.В.Ломоносова и Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт молочной промышленности

(72)Н.С.Егоров, Л.Г.Стоянова, И.Н.Пятницына и С.Б.Задояна

(53)577.15(088.8)

(56) Авторское свидетельство СССР 787471, кл. С 12 Р 21/00, 1980.

(54)ШТАММ БАКТЕРИЙ STREPTOCOCCUS LACTIS - ПРОДУЦЕНТ НИЗИНА

(57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промышленности. Цель изобретения - создание штамма - продуцента низина, дающего высокий выход низина при снижении срока. Штамм выделен из накопительной культуры молочнокислых бактерий микрофлоры свежего коровьего молока фермы ТСХА. Предложенный штамм имеет высокую антибиотическую активность низина в культуральной жидкости 3200- 3600 МЕ/мл.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промышленности. Цель изобретения - создание штамма - продуцента низина, дающего высокий выход низина при снижении срока. Штамм выделен из накопительной культуры молочнокислых бактерий микрофлоры свежего коровьего молока фермы ТСХА. Предложенный штамм имеет высокую антибиотическую активность низина в культуральной жидкости - 3200-3600 МЕ/мл.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промьшшенностях.

Целью изобретения является создание штамма - продуцента низина, дающего высокий выход целевого продукта при снижении срока инкубации при обычной температуре.

Штамм выделен из накопительной культуры молочнокислых бактерий микрофлоры свежего коровьего молока фермы ТСХА.

Морфологические признаки. Грам- положительные бактерии, неподвижные, бесспоровые. Стрептококки образуют цепочки из двух-четырех кокки, диплококки. На агаровых средах образуют колонии белые, блестящие, круглые с ровными краями мелкие (от 1 до 2 мм) лодочнообразной формы. При глубинном росте на этих же средах

3 (Л

колонии круглые, белые с диаметром до 2 мкм.

Культуральные признаки. При росте в стерильном обезжиренном молоке образует плотный сгусток. Характер роста в лакмусовом молоке: при 25- 30°С восстанавливает лакмусовое молоко и образует сгусток, при 40°С наблюдается частичное восстановление без образования сгустка. В бульоне (МПБ) с NaCl в концентрации 2-4% наблюдается рост, с 6,5% NaCl роста нет. В гидролизате молока с рН 9,2 растет, с рН 9,6 не растет.

Физиолого-биохимические признаки. Оптимальной температурой инкубирования шт. 199Х является 25°С. Рост минимален при 10°С, при 45°С - роста нет. Хорошо растет на средах, приготовленных на основе гидролизата молока, солевых средах с дрожжевым автолизасл ел

j

Јь 4

том, содержащих соли азота и фосфора. Штамм сбраживает глюкозу, лактозу, маннозу, галактозу, маннит, не сбраживает мальтозу, глицерин, сорбит, глицерин. Образует аммиак из аргинина, не образует каталазу, ацетоин, диацетил, т.е. является типичным представителем гомоферментативного молочнокислого брожения. При росте образует молочную кислоту (0,45%), полипептидный антибиотик низин (3000-3600 МЕ/мл). Штамм 119Х устойчив к эритромицину в концентрации 0,25 мкг/мл и фузидину (до 1 мкг/мл). Фагоустойчив, патогенностью не обладает. Бактерии хорошо развиваются на средах с рН 6,8-7,0, при рН 9,6 рост отсутствует, при рН 3,5 - рост также ингибирован.

Высокая активность штамма относительно стабильна при длительном хранении (4 г) в лиофильном состоянии в защитной среде, содержащей, %: же- латоза 11, сахароза 22; глютамат натрия 4,4; 3-замещенный цитрат натрия 50; в ампулах при 4-6°С. В течение месяца штамм 119Х можно хранить в виде молочного сгустка. Перевивку производят через месяц посредством внесения 1 микробиологической петли сброженного культурой молочного сгустка в стерильное обезжиренное молоко (8-10 мл), засеянный инокулят выращивают при 22-25°С в течение 10-12 ч.

Пример. Штамм Streptococcus lactis I19X восстанавливают в стерилном обезжиренном молоке и инкубируют при 25°С до образования сгустка. Микробиологической петлей сгусток переносят в стерильное обезжиренное молоко (8-10 мл) и инкубируют в течени 10-12 ч. Затем тем же способом сгус- ток вносят в посевную промежуточную среду состава: глюкоза 1, дрожжевой автолизат 25 мг% по азоту аммония, после 10-12 ч инкубирования 3% иноку лята переносят из посевной среды в солевую среду, содержащую, %: глюкоза 1,0; КгНР04 2,0; NaCl 0,2; MgS04 0,02; дрожжевой автолизат - в том же количестве, что и в посевной среде. Процесс ферментации ведут 10-12 ч пр комнатной температуре (22-25°С), что обеспечивает антибиотическую активность культуральной жидкости на уровне 3600 МЕ/мл.

Антибиотическую активность определяли микробиологическим методом с тест-культурой Bacillus coagulans. Среду для культивирования теста готовили на бульоне Хотингера с добавлением, %: глюкоза 1,0; NaCl 0,2j агар-агар 2,0. Средой для титрования антибиотика низина служили среда, приготовленная на фосфатном буфере с рН 5,0 с добавлением, % пептон 2,0; глюкоза 1,0; агар 2,0.

Ход определения. Культуральную жидкость экстрагируют ацетонуксусной смесью (в соотношении 4:1:5 соответственно) в воде при 55°С в течение 1 ч. Для этого 0,5 мл культуральной жидкости разводят в 4,5 мл смеси, полученный экстракт разводят фосфатным буфером (рН 5,0) в соотношении 1:10 и .1:20 и 0,12 мл вносят в лунки на агаровой среде, засеянной 1 суточной тест-культурой. По зонам ингибирования роста тест-организма в течение 14 ч определяют антибиотическую активность экстрактов в пересчете по калибровочной кривой, полученной при титровании растворов стандартного препарата Nisaplin, содержащего 5, 10, 15, 20 мкг/мл чистого низина.

Сравнительные данные антибиотической активности и процесса ферментации предлагаемого и известного штаммов приведены в табл.1.

Генетические особенности предлагаемого и известного штаммов приведены в табл. 2.

Предлагаемый штамм по сравнению с известными обеспечивает высокую антибиотическую активность низина в культуральной жидкости, сокращение длительности ферментационного процесса получения целевого продукта, а также ведение процесса инкубации продуцента без дополнительных затрат на подогрев ферментера, т.е. при комнатной температуре.

Формула изобретения

Штамм бактерий Streptococcus lactis 119X ВКПМ В-4204 - продуцент низина.

515517446

Таблица 1

Микроорганизм Антибиоти- ВремяТемпераческая ак- фермен-тура фетивность, тации,чментаци

ME/мл°С

Известный штамм- Streptococcus

lactis шт. МГУ 1800-2000 15-20 30 Предлагаемый штамм - Streptococcus lactis П9Х 3200-3600 10-12 22-25

Таблица2

Микроорганизм Отличительные при знаки

Известный штамм - Streptococcus

lactis шт.МГУMai MTlT eryS fuz5

-Предлагаемый штамм - Streptococcus lactis П9ХМаГ Mtl+ ery fuz

Редактор Н.Рогулич

Составитель Н.Афанасьева

Техред М.ДидыкКорректор А.Обручар

Заказ 309

Тираж 480

ВНИИЛИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Подписное