Способ получения S-аденозилгомоцистеина Советский патент 1990 года по МПК G01N7/00 G01N7/06 C12P19/40 

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам получения соединений, играющих ключевую роль в обмене серосодержащих клеточных компонентов и используемых в медицинской биохимии, экспериментальной онкологии и генной инженерии.

Целью изобретения является увеличение выхода S-аденозилгомоцистеина на 1 г ткани печени и получение меченого радиоактивными изотопами S- аденозилгомоцистеина с высоким уровнем включения метки.

На фиг. 1 представлен график динамики изменения уровня содержания

S-аденозилгомоцистеина в ткани печени крыс после введения им диоксипропиладенйна; на фиг.2 - график динамики изменения радиоактивности фракций S-аденозилгомоцистеина, полученных после хроматографии экстрактов ткани печени крыс после внутривенного введения Cj-метио- нина.

Достижение поставленной цели осуществляется за счет предварительного (за 2-6 ч до забоя) внутрибрюшин- ного введения диоксипропиладенйна с последующим (за 20 мин до забоя) внут- рибрюшинным введением L-метионина и

глицина. В результате получают 10- кратное увеличение содержания S-аде- нозилгомоцистеина (doHey) на 1 г печени крыс по сравнению с известным способом. Повышение выхода меченого радиоактивными изотопами S- аденозилгомоцистеина с высоким вклю- чением метки достигается путем введения животным внутривенно за 4-6 ми до забоя 2,5-10,0 мКи/кг массы тела, меченого радиоактивными изотопами L-метионина.

Пример 1, Самцам белых беспородных крыс весом около 200 г за 4 ч до забоя внутрибрюшинно вводят диоксипропиладенин в дозе 200 мг/кг массы тела в концентрации 200 мг/мл физиологического раствора. Затем за 20 мин до забоя внутрибрюшинно вводят L-метионин и глицин в дозе по 100 мг/кг каждый в физиологическом растворе. Животных забивают транслокацией шейного позвонка, извлекают печень и охлаждают в ледяном физиологическом растворе, гомогенизируют с IV Н,0 и 4V 50%-ной трихлоруксусной кислоты. Затем гомогенат центрифугируют в течение 20 мин при 6000 об/ми супернатант трижды экстрагируют 1V эфира, водную фазу фильтруют и на- носят на колонку (1 х. 1 см) с Се11ех-Р, уравновешенную 1 мМ НС1. Примеси отделяют пропусканием 100 мл 10 мЬ HCl, AdoHcy элюируют с 20 мл 50 Mh НС1 и определяют спектрофотометри- чески при 257 нм. Для длительного хранения элюат лиофилизируют„

Содержание Adollcy после укачанных воздействий составляет в печени более 1 мкг/r ткани, что более чем в 10 раз превышает его значение при использовании известного способа. Чистота продукта при этом составляет более 95%.

Пример 2, Проводят аналогич но примеру , но дня получения AdoHc меченого радиоактивными изотопами, д on or i деятельно за 5 мин до забоя животным внутривенно вводят 5 мКи/кг массы тела L- 3 Sj-метионина. При этом выделяют около 100 мкКи DL- -AdoHcy или 50 мкКи -AdoHcy с удельной активностью около 20 мкКи/ммоль, Чистота продукта более 95%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет в лабораторных услови- ях быстро и достаточно просто получать значительные количества S-аде- нозилгомоцистеина - до 1 мкг/г ткани печени, инъекция же меченого радиоактивными изотопами L-метионина обеспечивает выход 100 мкКи DL psSJ- -AdoHcy с удельной активностью до 20 мкКи/ммоль. Чистота продукта при этом составляет более 95%.

Полученные предлагаемым способом препараты немеченого и меченого S- аденозилгомоцистеина по своим характеристикам удовлетворяют требованиям, предъявляемым к этому соединению в целях его использования для определения тестовых ферментативных ак- тивностей серосодержащих соединений клетки, в ингибиторном анализе систем переноса метильных групп. Кроме того, применение способа ускорит и упростит обеспечение работ в облас- ти экспериментальной онкологии, медицинской биохимии и генной инженерии таким важным клеточным интерме- диатом, как S-аденозилгомоцистеин.

( Формула изобретения

1. Способ получения S-аденозил- гомоцистеина, включающий внутрибрю- шинное введение L-метионина и глицина} забой животного,извлечение печени, ее гомогенизирование, экстракцию эфиром, хроматографию на фосфоцел- люлозе Cellex-Р, лиофшшзацию выделенного продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода S-аденоэилгомоцистеи- на на 1 г ткани печени, за 2-6 ч до забоя вводят диоксипропиладенин в дозе 150-250 мг/кг массы тела в концентрации 150-250 мг/мл физиологического раствора.

0

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью получения меченого изотопами Sr-аденозил- гомоцистеина с высоким уровнем включения метки, за 4-j6 мин до забоя животным дополнительно внутривенно вводят 2,5-10 мКи/кг массы тела L-метионина, меченого радиоактивными изотопами .

I

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии. Цель изобретения - увеличение выхода S-аденозилгомоцистеина на 1 г ткани печени и получение меченого радиоактивными изотопами S-аденозилгомоцистеина с высоким уровнем включения метки. Цель достигается через внутрибрюшинное инъецирование животным диоксипропиладенина в дозе 150 - 250 мг/кг массы тела в концентрации 150 - 250 мг/мл физиологического раствора за 2 - 6 ч до забоя и введение за 20 мин до забоя L-метионина и глицина в дозе 100 мг/кг массы тела в физиологическом растворе, с последующими извлечением печени, гомогенизацией, центрифугированием, экстракцией диэтиловым эфиром, хроматографией на колонке с фосфоцеллюлозой CELLEX-P, элюцией целевого продукта и его лиофилизацией. Предлагаемый способ позволяет получить выход S-аденозилгомоцистеина - 1 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченого S-аденозилгомоцистеина составляет 20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ по экспериментальной онкологии, медицинской биохимии S-аденозилгомоцистеином, 1 з.п. ф-лы. 2 ил.

Ј §

г чб в ю п го w so

Вреня, мин Фие.2