Способ получения аффинного сорбента для очистки лектинов Советский патент 1990 года по МПК B01J20/22 C12N11/00 

Изобретение относится к биотехнологии, касается синтеза аффинных сорбентов и может быть использовано для очистки лектинов.

Целью изобретения являетйя увеличение сорбционной емкости сорбента.

Предлагаемый способ получения аффинного сорбента заключается в том, что нерастворимую при рН 5,0 часть гликопротеидов куриного яйца, содержащую богатый углеводами гликопротеид овомуцин, обрабатывают глутаровым альдегидом для поперечной сшивки и получения геля, пригодного для аффинной очистки лектинов.

При мер. Белки 20 куриных яиц отделяют от желтка, затем их подкисляют до рН 5,0 10%-ной ацетатной кислотой, образующийся осадок отделяют центрифугированием 10 мин при 6000 g, затем его взвешивают и тщательно перемешивают с 25%-ным раствором глу- тарового альдегида, добавленного до

1%-ной конечной концентрации, и оставляют на 24 ч для поперечной сшивки. Затем полученный гель измельчают путем перетирания через металлическое сито с диаметром отверстий 0,25 мм, полученные частички промывают дистиллированной водой, затем последовательно обрабатывают 1%-ным раствором трис-(оксиметил)аминометана и 2-3%- ным раствором глицина по 12 ч при 4 С. Полученный гель промывают соответствующим буферным раствором и используют в работе. Дтя улучшения гид1- родинамических свойств полученного гапя рекомендуется выдерживание его в течение 30 дней в 3%-ном растворе фенола. Обработанный таким образом гель значительно меньше изменяет свои размеры в кислой и щелочной средах. Выход аффинного сорбента около 200 см3 из 20 куриных яиц. Хранить гель необходимо в 1-3%-ном растворе фенола. При таком хранении на протя(Л

ел ел

4 СО

ОЭ

жении двух лет не наблюдается заметных изменений свойств геля. При работе его необходимо отмыть от фенола и уравновесить соответствующим буферным раствором. Гель можно использовать в работе многократно.

Сорбционная способность полученного аффинного сорбента излучается по следующей методике.

К равному объему аффинного сорбента, отмытого от консерванта и уравновешенного 0,2 М ацетатным буферным раствором, рН 6,5, содержащего по 1 мМ СаС1г и МпС12, добавляют равный объем раствора лектина с титром гемлп люгнн-|цин от 1:64 до 1:204 (в залиеимлсти от природы лектина). Смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре, а затем после оседания геля на дно пробирки измеряют титр гемагглютинации надоса дочной жидкости. Если титр гемагглю- тинэции в нлдосадочной жидкости уменьшается в два раза, то лектин на геле не сорбируется, так как уменьшение титра гемагглютинации идет за счет разбавления раствора в два раза. Если наблюдается уменьшени титра гемагглютинации в 4 раза, то на сорбенте сорбируется примерно 50% лектина, если титр гемагглютинации уменьшается в 8 или 15 раз, то на геле сорбируется соответственно 75 и 87% лектина. Чем больше снижается титр гемагглютинации в надосадочной жидкости, тем больше сорбционная емкость сорбента по отношению к данному пектину.

0

5

0

5

Результаты изучения сорбции лек- тинов различной углеводной специфичности на предлагаемом геле представ-| лены в таблице.

Анализ полученных результатов показывает, что областью применения предлагаемого афинного сорбента яв- тяется очистка Н-ацетил-П-галактоз- амин- и D-галактозоспецифичных лек- тинов, а также лектинов, специфичных к олигомерам -ацетилНО-глюкозамива, сорбция которых на предлагаемом аффинном геле высока. Аффинный гель непригоден для очистки D-глюкоэоспе- цифичных и L-фукозоспецифичных лектинов.

Десорбцию лектина можно осуществлять либо специфическим ингибитором (углевод), либо боратным буферным раствором (рН 8-10), либо понижением рН до 3-4 с помощью кислоты или буферного раствора. Выбор способа десорбции необходимо проводить в каждом конкретном случае в зависимости от природы лектина. Формула изобретения

Способ получения аффинного сорбента для очистки лектинов, включающий поперечную сшивку источника гли- , копротеидов из куриного яйца глутаро- вым альдегидом, отличающий- с я тем, что, с целью увеличения сорбционной емкости по отношению к D-галактозо- и Г -ацетил-В-галактоэ- аминспецифичным лектинам, в качестве источника гликопротеидов используют фракцию гликопротеидов, нерастворимую при рН 5,0.

Изобретение относится к биотехнологии, касается синтеза аффинных сорбентов и может быть использовано для очистки лектинов. Целью изобретения является увеличение сорбционной емкости сорбента. В предлагаемом аффинном сорбенте нерастворимая при PH 5,0 часть гликопротеидов куриного яйца содержит богатый углеводами гликопротеид овомуцин, который путем поперечной сшивки глутаровым альдегидом может быть превращен в гель, пригодный для аффинной очистки лектинов. 1 табл.

Семена ширицы хвостатой

Семена ширицы запрокинутой

Омела белая

Семена арахиса

Семена фасоли обыкновенной

Семена лимской фасоли

Кора бузины красной

Семена сои

Семена бобовника анагиролистного

50

Примечание. Прочерк обозначает отсутствие

сорбции на гелях.