Способ культивирования лейкоцитов свиньи Советский патент 1990 года по МПК C12N5/00 

Изобретение относится к биотехнологии и имеет отношение к культивированию клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, мо- ноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Пример 1. Во флаконы с питательной средой № 199 и 15% сыворотки крупного рогатого скота (КРС) после добавления антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мг/л пипеткой стерильно вносят индолилуксусную или гибберелловую кислоту 20 мг/л. Клетки лейкоцитов подсвинков в возрасте 3 мес суспендируют в приготовленной таким образом среде, доводя их концентрацию до 3 млн кл/мл. 1 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики вносят в бактериологические пробирки. Пробирки укладывают в штатив под углом 30-401 и помещают в термостат при 37°С, Через 3 сут культивирования формируется монослой клеток типичной морфологии. Численность клеток определяют в камере Горяева.

Количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с 20 мг/мл индолилуксусной или гибберел- ловой кислоты составляет соответственно 4,81-5,Ю-106 и 5,15-5,71 х х 10 кл/мл, в то время как в контроле 3,50-4,10-10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3,0-3,5 млн кл/мл),

П р и м е р 2. Во флаконы со средой № 199 и 15% сыворотки КРС после добавления антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл пипеткой вносят индолилуксусную или гибберелловую кислоту 150 мг/л. Клетки лейкоцитов подсвинУ1

35

:л

35

N5

3157

ков в возрасте 3 мес суспендируют в приготовленной таким образом среде, доведя их концентрацию до Змлн кл/мл По 1 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики вносят в бактериологические пробирки. Пробирки укладывают в штатив под углом 30-40° и помещают в термостат при 37&С. Через 3 сут культиви- рования формируется монослой клеток типичной морфологии. Численность клеток определяют в камере Горяева.

Количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с индолилуксусной или гибберелловой кислотой составляет соответственно 27,00 - 28,15-10 и 20,05 - 21,10 «10 по сравнению с контролем 3,50- 4,10-10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3-3,5 млн кл/мл).

Пример 3. Опыт проводят в соответствии с примерами 1 и 2,но в питательную среду вносят 250 мг/л индолилук- усной или гибберелловой кислоты. В этих условиях количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с индолилуксусной или гибберелловой кислотой составляет

соответственно 5,33-5,41-10 и

5

5

0

0

4

6,10-6,34-10 кл/мл по сравнению с контролем 3,50-4,10 -10 6 кл/мл (при посевной дозе клеток 3-3,5 млн кл/мл). i

Способ позволяет значительно повысить стимуляцию роста клеток лейкоцитов свиньи на питательной среде с применением фитогормонов. Количество клеток культуры при добавлении фитогормонов увеличивается в 6-8 раз. Стимулирование роста клеток некоторых очень важных клеток животного организма может быть использовано также в диагностических исследованиях.

Формула изобретения

Способ культивирования лейкоцитов свиньи, включающий засев клеточной суспензии на питательную среду с добавлением сыворотки крупного рогатого скота и последующим инкубированием культур до формирования монослоя, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в культивируемую среду добавляют индолилуксусную или гибберел- ловую кислоту в концентрации 20- 250 мг/л среды.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к культивированию клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Способ включает засев суспензии лейкоцитов свиньи на питательную среду с добавлением 15% сыворотки крупного рогатого скота и последующим инкубированием культур до образования монослоя, причем в культивируемую среду добавляют 20-250 мг/л фитогормонов, например индолилуксусную или гибберелловую кислоту. Выход лейкоцитов увеличивается в 6-8 раз по сравнению с прототипом.

Составитель А.Маныкин

Корректор А.Обручар

Редактор Н.Рогулич Техред Л.Сердгакова

fffl mf ,.«.- „..-, .Ц.- ,«- - .,.-...-...-., - , ,.-,

, -- -.. . - «.--«.- - - .- --. - --«-

Заказ 1830 Тираж 484Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Корректор А.Обручар