Способ культивирования клеток человека и животных Советский патент 1986 года по МПК C12N5/00 C12N5/02 

Изобретение относится к биотехнологии и касается культивирования клеток человека и животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований.

Целью изобретения является повышение пролиферативной активности клеток за счет улучшения ростовых и адгезивных свойств среды.

Пример 1. Культивирование клеток Vero.

Во флакон со средой RPMI-1640 стерильно после добавления антибиотиков из расчета пенициллин 100 ад./мл, стрептомицин 100 мкг/мл пипеткой вносят сыворотку крови овцематок 130 дней суягности в следующем объемном соотношении компонентов, %: среда 90; сыворотка 10. Клетки Vero суспендируют в приготовленной таким образом среде, доведя их концентрацию до 90000 кл./мл. По 10 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики вносят во флаконы с рабочей поверхностью 20 см . Флаконы помещают в термостат при 37°С. Через 4-5 сут культивирования формируется монослой клеток с типичной морфологией.

Процент адгезии через 4 ч при использовании питательной среды с экспериментальными сыворотками суягных овцематок серий 1 и 2 составляет 138 и 134 соответственно, в то время как

Редактор Н.Швьщкая Заказ 4882/20

Составитель М.Серова Техред М.Ходанич

Корректор

Тираж 490Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

0

5

0

5

0

в контроле он равняется 106 (при посевной дозе клеток 120000 кл./мл).

П р и м е р 2. Культивирование клеток ФЭК.

Во флаконы с питательной средой 199 после добавления антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед./мл, стрептомицин 100 мкг/мл пипеткой стерильно вносят сыворотку овцематок 135 дней суягности при следующем объемном соотношении компонентов, %: среда 99,75; сыворотка 0,25. Клетки, фибробластов 9-10-дневных эмбрионов кур (ФЭК) суспендируют в приготовленной таким образом среде, доводя их концентрацию до 500000 кл./мл 2 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики вносят в бактериологические пробирки. Пробирки укладывают в штатив под углом 30-40 и помещают в термостат при 37 С. Через 2-3 сут культивирования формируется монослой клеток типичной морфологии.

Индекс пролиферации при использовании сыворотки суягных овцематок серии 1 составляет 0,660 по сравнению с 0,240 при использовании сыворотки крупного рогатого скота (при посевной дозе клеток 300000- 400000 кл./мл).

Предлагаемый способ позволяет значительно удешевить процесс культивирования клеток и обеспечить получение на клеточных субстратах различных биологически активных веществ.

Корректор О.Луговая