Способ определения геометрических (син-анти-)изомеров 2-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-2-алкоксиминоуксусных кислот и их производных Советский патент 1990 года по МПК G01N30/22 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения геометрических изомеров 2-(2-амино-1,3-Тиазол-4-ил)-2-алкок- симиноуксусных кислот и их производных методом обращенно-фазной жидкостной хроматографии

Кз-шД

с-с

II

,

-° (I)

1

где R, - он, ОС,Н. ONa , С1,

/СНз 2-СНз,-С -- СООС(СНз)з.Н

сн.

о

Кз-Н,-С-(СбН5)з. ClCHjCи может использоваться в химических и биохимических лабораториях.

Цель изобретения - повышение точности определения.

Способ осуществляется следующим образом.

Навеску образца (/s,0,1 г) помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, добавляют 2 мл 0,2 Н раствора бикарбоната натрия и после полного растворения пробы доводят объем до метки. Аликвотную часть (6 мкл) по- лученного раствора вводят в потрк подвижной фазы, в качестве которой

СП

00

со to

о

СП

31589205

содержащую 11 - ого модификатора - этанола, или их

ж ж е в со а

смеси, и имеющую значение водородного показателя 2,2-6,1 рН, устанавливаемое О,IN раствором соляной кислоты. Детектирование компонентов, элюированных в потоке подвижной фазы из колонки (62x2 мм), заполненной

сорбентом Силасорб Cj или С

(S

(7,5 мкл), осуществляют спектрофото- :метрическим детектором при длине |вйлньГ230-2 0 нм.

Расчет массовых долей анти- и син-изомеров проводят по формуле

А

-JV

h-a

К

где А - массовая доля анти- или синизомера, %j

h,,h - высоты пиков для анализируе- пробы и образца, содер- или син-изомег

.i

мои

жащего анти- ра, мм i а - массы анализируемой пробы и

образца анти- или син-изомер с - массовая доля основного вещества в образце анти-иЗоме- ра или син изомера, % К - коэффициент, учитывающий

разведение образца анти- или син-изомера.

Прямолинейная зависимость высоты пика определяемого изомера от его концентрации лежит в интервалах массовых долей от 0,05 до 2% для изомеров анти-конфигурации и в интервалах массовых /1олей от 0,005 до 0,2 для Изомеров син-конфигурации. Объемы удерживания изомерных соединений, имеющих общую формулу (1), в зависимости от вида радикалов R, Rj, Rj, входящих в состав молекулы, заключены в интервалах мкл при расходе подвижной фазы 100 мкл/ /мин и комнатной температуре.

Пример 1. Определение геометрических изомеров соединений общей формулы (1), где RI - ОН, С1, СЕ у R J- ClCHjCO.

В мерную колбу вместимостью 10 мл вносят 0,1 г технической 2-ами моти- азолимметоксиминуксусной кислоты, добавляют 2 мл 0,2N раствора бикарбоната натрия до полного растворения пробы и доводят объем до метки дис

o

5

0

5

0

5

0

тиллированной водой (раствор А). Дозатором вводят в колонку, заполненную сорбентом Силасорб Cj, 6 мкл раствора А. Подвижная фаза содержит 15 об.% этанола и имеет рН 2,5. Из-, меряют высоту пика с объемом удерживания 9бО мкл. Параллельно при тех же условиях хроматографируют 6 мкл раствора образца анти-изомера 2-ХАТМУК, приготовленного путем растворения 0,1 г образца анти-изомера в 0,2N растворе бикарбонатнатрия в мерной колбе на 10 мл и разбавленного затем водой в соотношении 1:200, и измеряют высоту пика с объемом удерживания 9бО мкл,1 мл раствора А пипеткой вместимостью 1 мл переносят в мерную колбу на 10 мл, доводят объем до метки дистиллированной водой (раствор Б). В описанных условиях хроматографируют 2 мкл раствора Б, измеряют высоту пика с объемом удерживания мкл. Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора очищенной пробы син-изомера 2-ХАТМУК, приготовленного растворением 0,1 г очищенной пробы син-изомера в 0,2N растворе бикарбоната натрия в мерной колбе на 10 мл с последующим разбавлением полученного раствора в сотношении 1:10, измеряют высоту пика с объемом удерживания 240 мкл. Установлена массовая доля анти-изомера 0,8 и син-изомера 95,7

Пример 2. Определение геометрических изомеров соединений общей формулы (1), где R,

R. - СН. с - COOCCCHJ, ,-Н; R, OCjHy,

3

сн.

3,3

5

0

5

Н, () 3 -с, на примере этилового эфира 2-ХАТМУК.

В мерную колбу вместимостью 10 мл вносят 0,1 г технической пробы этилового эфира 2-ХАТМУК (R , - , R - CHgj э Н), добавляют ацето- нитрил до полного растворения пробы, доводят объем до метки ацетонитрилом и получают раствор А. В колонку, заполненную сорбентом Силасорб С„ , вводят 2 мкл раствора А, элюируют подвижной фазой, содержащей 30 ацетонитрила и имеющей значение рН 3,5, и измеряют высоту пика с объемом удерживания 1260 мкл.

Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора образца анти-изомера этилового эфира

2-ХАТМУК, приготовленного путем растворения 0,1 г образца анти-изо- мера в ацетонитриле в мерной колбе на 10 мл с последующим разбавлением водой в соотношении 1:200, измеряют высоту пика с объемом удерживания 12бО мкл. 1 мл раствора А пипеткой на 1 мл переносят в мерную колбу (10 мл) и доводят §бъем до метки ацетонитрилом, получая раствор Б, Хроматографируют 2 мкл раствора Б, измеряют высоту пика с объемом удерживания Т 10 мкл. Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора очищенной пробы син-изоме- ра этилового эфира 2-ХАТМУК, приготовленного путем растворения 0,1 г очищенной пробы син-изомера эфира 2-ХАТМУК в ацетонитриле в мерной колбе (10 мл) с последующим разбавлением полученного раствора в соотношении 1:10, и измеряют высоту пика с объемом удерживания lAlO мкл.

Пример 3. Определение геометрических изомеров соединений общей формулы (1). где R - ОН, ONa, СН

Л

R. - СН-, -С - COOC(CHJ, R, - Н, гн J J 3

CHj

-C(.)j.

в мерную колбу вместимостью 10 мл вносят 0,1 г технической пробы 2-ХАТМУК (R, - ОН, R - СН, R з - Н) и готовят раствор А аналогично примеру 1, используя О,05N раствор би-- карбоната натрия. Вводят в колонку, заполненную сорбентом Силасорб С, 2 мкл раствора А и элюируют водой, в которой модификатором (12 об.%) является смесь этанола и ацетонитри- ла с объемными долями 5 и 7% соответственно. Подвижная фаза имеет рН Измеряют высоту пика с объемом удерживания 11б7 мкл. Параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раствора образца анти-изомера 2-ХАТМУК, приготовленного аналогично примеру 1, используя растворитель 0,05М NaHCOj.

1 мл раствора А пипеткой вместимостью 1 мл переносят в мерную колбу на 10 мл и доводят объем до метки дистиллированной водой, получают раствор В. В описанных условиях хроматографируют 2 мкл раствора Б и измеряют высоту пика с объемом удержи

. 1

вания 460 мкл, параллельно в тех же условиях хроматографируют 2 мкл раст-- вора очищенной пробы син-изомера 2-ХАТМУК. приготовленного по описанной схеме.

Пример t. В мерную колбу вместимостью 100 мл пипеткой на 1 мл вносят 0,5 мл реакционной массы цесса получения этилового эфира

2-АТМУК (R - , R - CH, ;. Rj - H), объем до метки доводят ацетонитрилом (раствор А), В колонку, заполненную сорбентом Силасорб С,- ,

15 вводят поочередно по 2 мкл реакционной массы и раствора А, элюируют 27 об.% ацетонитрила рН , измеряют высоты пиков с объемами удерживания 12бО мкл (при вводе реакцион20 ной массы) и Q мкл (при вводе раствора А). Параллельно в тех же условиях хроматографируют по 2 мкл растворов син- и анти-изомеров, приготовленных согласно примеру 2, и

25 измеряют высоты пиков с объемом удерживания 12бО и I llO мкл.

Установлена массовая доля в пробе 1б% син-изомера.

Примеры 5-17. Определение

30 син- и анти-изомеров производят при различных долях модификатора и величине значения рН в подвижной фазе. Результаты представлены в таблице.

35

Формула изобретения

Способ определения геометрических (син-анти-)изомеров 2-(2-амино-1,3- тиазол- -ил)-2-алкоксиминоуксусных кислот и их производных с помощью обращенно-фазной жидкостной хроматографии путем хроматографирования анализируемой пробы в потоке подвижной фазы на основе воды, содержащей органический модификатор и имеющей фиксированное значение рН, на колонке с силикагелем, модифицированным октильными группами, и детектирования разделенных компонентов спекто- фотометрическим детектором, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, подвижная фаза на основе воды содержит 11-33 об. органического модификатора, в качестве которого используют

и (или) ацетонитрил, и (или) этанол, или их смесь при значении рН 2,2-6,1.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения син- и анти-форм соединений цефалосперинового ряда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Целью изобретения является повышение точности определения. При ВЭЖХ пробы смеси используют в качестве подвижной фазы воду, содержащую органический модификатор в количестве 11-33 об. % и меньшую PH=2,2-6,1. В качестве модификатора используют или ацетонитрил, или этанол, или их смесь. Сорбент силасорб С 8 или С 18. 1 табл.