Способ получения растительного материала для размножения растений Советский патент 1990 года по МПК A01H3/00 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к вегетативному микроразмножению растений в стерильных .культурах тканей.

Целью изобретения является повышение эффективности способа.

По способу-прототипу (вариант I)

черенок растения Amsonia tabernaemon

tana дает в течение 1 мес. приблизительно 5 боковых ростков. Их срезают и помещают в твердую питательную сре- ДУ, Через 1 мес, они начинают пускать корни, т.е, только одну фибриллу, 5 полученных растений пересаживают наконец в землю.

Для предлагаемого способа характерным является то,, что стерильные

черенки побегов растений помещают в соответствующий сосуд с твердой питательной средой, затем сосуд заполняют питательным раствором, содержащим, при желании вещества, регулирующее рост, и оставляют побеги в этой погруженной системе для прорастания. Возникшие разветвленные культуры, имеющие пазушные иочки и боковые побеги, нарезают на части, появившиеся при этом верхушечные побеги образуют корни по известному способу и по истечении переходного периода в теплице, высаживают на открытом воздухе, ;еренки, полученные из нижней и средне.й части культуры побега, снова культр пируют.

Для подкрепления твердой питательной среды представляется целесообразным применение агар-агара. Твердая питательная среда обеспечива€;т растение основными питательными в щества- ми. Питательные вещества проводятся через сосудистый пучок. Твердая питательная среда необходима для того, чтобы побеги могЛи принять положение соответствующее естественным уело--. ВИЯМ, т.е. .вертикальное„

Жидкий питательный раствор обеспечивает культуру побега дополиит ель- ными питательными веБ1ествами„ Культуры, залитые негормональным питатель ным раствором, содержащим минеральные соли, сахар и витамины, образуют побеги,.которые на 30 - 100% толще и длиннее, чем побеги, ке погруженные в питательньШ раствор.

Однако к жидкому питатель::- ому рас В.ОРУ могут быть добавлены .также рас- тительные гормоны. Из них следует упомянуть ауксин, цитокинин -л гиб- береллин,Из цитокинииов особенно удачным оказался б-бензиламинопурин (6-бензиладенин). Под воздействием регуляторов.роста растений происходит массовое развитие побегов погруженной культуры. Это развитие происходит интенсивнее примерно на 100-500%, чем в культурах, которым регулятор роста подавался в основную питательную среду. В культуре, зали той ясидким питательньП раствором, содержащим цитокинин, происходит образование листовых почек и верхуше побегов на всей поверхности погруженной части растения, даже, вновь образованные почки продолжают разветвляться, дальше,

- 90029 4

Вариант II, .Из исследованных 10- 15 летних растений Amsonia tabernae- montana на содержание биологически активных веществ был отобран один экземпляр с содержанием таберзонина 12,26%, В апреле от з.того растения были срезаны побеги длиной 25-30 см примерно с 20 листочками. Затем побе1Q ги для лучшего пользования нареза-, лись на части длиной примерно 10 см и в течение -1 ч промывались под водопроводной водой. Затем листья снова срезались примерно на четверть своей

15 величины, -Подрезанные таким образом части побегов стерилизовались в 3%- ном растворе гипохлорита натрия в течение 15 мин при постоянном встряхивании. Из раствора гипох)1орита чае20 ти растений помещались в дистиллированную воду, стерилизованную в автоклаве, и промывались при встряхи- ванш-1 в течение 10 мин. Это действие также как и последующие осу25 ществлялось в асептических условиях в стерильном прививочном шкафу. Побеги, взя.тые из стерильной воды на- ре.зались скальпелем в стерилизованной теплом чап1ке Петри на части,

3Q имеющие по 2-3 листочка, причем под самым нижним листком оставлялась часть побега длиной примерно 1 см. Подготовленные таким образом черенки помещались в стеклянные колбы объемом 200 мл, каждая из которых содержала 100 мл улучшенной питательной среды Муращиге-Скуга. Штатель- ная среда имела слудующий состав, мг/л:

35

IlCl

5

0,5

0,1

При использовании учитывалось то, чтобы черенки полностью до первого листочка находились в питательной среде. Колбы содержались при температуре ZO-P-S C в то время как ежедневное 16-ти часовое искусственное освещение достигло силы освещения 10000 л Через неделю в пазухах листа появились листовые почки, fepeз следующие две недели из них выросли побеги длиной примерно 5-7 см, имеющие 10- 12 листков.

Эти стерильные боковые побеги разделялись и нарезались на части,

имеющие по 2-4 листочка. Эта рассада высаживалась в питательную среду указанного состава на глубину по меншей мере 1 см (поэтому необходимо пр нарезке под последним листком оставлять место соответствующей длины).

Затем еще раз подготавливалась подобн-ая питательная среда, но без агар-агара, вместо которого использовали 1 мг/л 6-бензиламинопурин. 50 мл этого жидкого питательного раствора наливали в каждую колбу объемом 200 мл. %ренки, находящиеся под питательным раствором, при температуре 20-25 С постоянно подвергались освещению силой 8000 лк.

На всех пазухах листа образовались листовые почки, из которых в течение 3-4 недель выросли побеги длиной 5-10 см. Характерным для них явилось то, что они также со своей стороны снова образовали почки и побеги. Самые сильные побеги выросли из жидкой питательной среды, часть находившаяся на воздухе, образовала мало листовых почек в пазухах листа или больше их не образовывала. Теперь культура делилась. Срезались верхушки побегов, имеющие 5-7 листков, ставились в твердую питательную среду и через 2 недели, когда образовывалось достаточно корней, высаживались в землю.

Оставшаяся нижняя и средняя часть культуры нарезалась на куски с 2-4 листочками или 5-10 почками на каждо Затем они также ставились в твердую питательную среду указанного состава и по предлагаемому способу заливались жидким питательным раствором, содержащим 1 мг/л 6-бензиламиноггурик.

ь

. ,

10

20

25

590029

на. Культуры культивировали при 20- 25 С и постоянном освещении с силой / освещения, равной 8000 лк в течение 2-4 недель. За это время вырастают уже имеющиеся боковые побеги, разветвляются дальше .и образуют новые почки. Соответственно образованные верхушечные побеги срезаются и образуют корни, остаток культуры снова нарезается на части с почками и.побегами.

Изучалось погруженное размножение эстрагона Artemisia dracunculus без )5 регулятора роста (вариант III).

От выросшего на открытом воздухе эстрагонного растения Artemisia dracunculus, сорт Grune Wurre в июне бмли срезаны побеги длиной примерно 10 см.. Побеги промывали в течение 2 ч под подопроводной водой, затем стерилизовали в 3%-ном растворе хлорита натрия в течение.10 мин, после чего промывали стерильной дистиллированной водой в течение 20 мин и нарезали в стерильных условиях на части примерно 3 см длиной и имеющие по 2-4 листочка. Эти черенки ставили в

питательную среду соответственно ва- 30 рианту II, Однако питательный раствор не содержал регулятора роста растений.

Под действием жидкого питательного раствора культуры побегов начинали интенсивно расти. Рост культуры оказался сильнее в 2-5 раз по сравнению с культурой, не имеющей жидкой питательной среды. Культуры вьдер- живаются при температуре 20-25 0 при постоянном искусственном освещении с силой освещения 8000 лк. Культуры побегов, находящиеся в колбах объемом 200 мл и содержащими 100 мл питательной среды, за 4-5 недель пол- ностьЕо -занимали воздушное пространство колбы. ГЬбеги длиной 8-15 см были толгдиной 2-3 мм, набухшие и относительно мало разветвленные.

Культуры побегов нарезали на час- 5Q ти с 2-4 листочками, подходящие как для корнеобразования, так и для культивирования сле.дующих побегов.

Для корнеобразования черенки побегов ставили на 24-96 ч в питательную среду в соответствии с вариантом II, которая дополнительно еще содержит 1 мг/л 2,4-дихлорЛеноксиуксусную кислоту. Затем черенки переводятся в питательную среду без регулятора

35

40

.45

55

роста, где через две недели на каж-- дом черенке-образуются корни длиной 5-10 см по мере ладобности 2-5 см. Растения с образованными корнями, если нужно получить материал для посадки, содержится без жидкого питательного раствора.

Однако растения с образованными корнями можно также поместить в жидкий питательньй раствор. В этом случае одновременно происходит массовое размножение побега. Путем систематического повторения пг1едлагае- мого .способа в течение одного года из одного побега можно получить 100 000 растений с корнями.

Изучалось погруженное размножение Catharantus roseus (vinca rosca) с кинетином. С растений Catharantus, растущих в теплице, срезали боковые побеги длиной 10-15 см. В течение 4 побеги промывали под водопроводной водой, затем оставляли в 1% -ном растворе гипохлорита натрия в течение 25 мин и непосредственно после этого npoi-швали в стерильной дистиллированной воде в течение 30 мин. Побеги нарезали на черенки с 2-4 листочками и по способу, описанному в варианте II, ставили в твердую питательную среду, выдерживали при температуре 25-28°С и ежедневно в течение 16 ч освещали с силой освещения 10 000 лк Верхушки черенков продолжали расти, однако в целом не разветвлялись, а из черенков, полученных из боковых побегов, появлялись большей частью два боковых побега.

Через 3-4 недели возникшие боковые побеги и выросшие верхушечные побеги нарезали и черенки ставили в твердую питателнную среду согласно варианту II. Колбы с черенками заполняли жидким питательным раствором по 50 мл. Состав питательного раствора соответствовал рецепту, указанному в варианте II с тем различием, что раствор не содержал агар- агар, а вместо него - кинетин в концентрации 1 мг/л. В колбах, заполненных раствором, боковые побеги стали в 2-3 раза толще, чем побеги, выросшие на твердой питательной среде без заливки питательным раствором. Чем чаще полученные побеги прививаются, тем.интенсивнее становится развити.е побегоп, а также корнеобра- зование верхушечных побегов становится лучще. Путем систематического повторения предлагаемого способа из одс ного единственного верхушечного побега в течение одного года можно получить примерно 100 000 верхушечных побегов.

Формула из.обретен -и я

Способ получения растительного материала ддя размножения растений, включающий высаДку стерильных черенков побегов растений.в сосуд с агаризованной питательной средой, со- держардей в качестве регулятора роста цитокинин, культивирование на этой среде до появления боковых побегов, микрочеренкования их, помещение черепков на питательную среду для укоренения, пересадку укорененных черенков в теплицу, а затем в открытый грунт, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности

способа, после высадки стерильных черенков побегов растений в сосуд с агаризованной питательной средой, сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного

погружения черенков, культивирование осуществляют при 16-часовом фото- периоде, причем на питательную среду для укоренения помещают черенки, полученные из верхушек побегов, а

черенки из средней и нижней частей побегов возвращают на стадию культивирования с полным погружением в жидкую питательную среду.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к вегетативному микроразмещению растений в стерильных культурах тканей. Целью изобретения является повышение эффективности способа. Получение растительного материала для размножения растений осуществляется путем высадки стерильных черенков побегов растений в сосуд с агаризованной питательной средой, содержащей в своем составе в качестве регулятора роста цитокинин. После этого сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного погружения черенков, культивируют при 16-часовом фотопериоде до появления боковых побегов, микрочеренкуют их и помещают черенки, полученные из верхушек побегов, на среду для укоренения, а черенки из средней и нижней частей побега возвращают на стадию культивирования с полным погружением в жидкую питательную среду. Укорененные черенки пересаживают в теплицу, а затем - в открытый грунт. Культивирование черенков на агаризованной питательной среде с дополнительным погружением их в жидкую питательную среду того же состава позволяет увеличить число боковых побегов, усилить их рост, побеги в 2-3 раза становятся толще. Путем систематического повторения способа в течение года можно получить до 100000 верхушечных побегов из одного исходного черенка.