ТМКИ ИТАЛИА» (Италия)Действительные изобретатели Эрнст Борис Чейн, Тоноло Антонио н Бонино Чезаре Советский патент 1963 года по МПК C12P33/00 

MsBectribi способы получеи 1я производных л 1зергинозой и изолизергингвон кислот путем гл бинной фер.меитацпи культуры Claviceps на исг;уссгвениых питательных средах.

По лредлагс-е.мому способу для получения пр.онззодных лизергиновой изо.1нзерги |ОБО11 кис,:от предлагается испо.1ьзозать штамм гриба Claviceps paspali Stev. et Hall, который предварительно выращивают на зародышах ржи.

Гриб вырашивают в погруженной культуре в темноте при температуре 22-30 С (предпочтительно при 27°С), в аэробных условиях на питательной среде, содержаш,ей источники углеводного и азотного питания и минеральные соли, при рН среды 4,2-6,0 (преимушественно 5,2). Алкалоиды обычно начинают образовываться через 2 дня после начала роста гриба; их оптимальная концентрация достигается через 7-9 дней.

В качестве источников азотного питания обычно используют муку из сои, гороха, земля,ного ореха, картофеля, вытяжку солода и т. .п..

№ 159469

источниксЗ углеводного питания - глюкозу, тростниковый и молочный сахар и т. п., мннеоальиых селей - преимущественно сернокислый мпглнй к дв;узал1еш,еП1ый фосфорнокислый кали.

Алкалоиды лизергинозого ряда из среды выделяют экстракцией оргапическими раст::0рителя.мн, такими как бензол и хлорофор.м, или адсорбциеГ твердыми адсорбентами, например активированным углем. Полученные амиды лизергиновой и Г13олизергиновой кислот гидр- лизуют н соотве1тствуюш,ие кислоты выде; яют обидеизг естными нриемами.

Пример 1. В склянку емкостью 0,5 л со 100 мл ннтательной среды, содержащей 5% маннмтода, % янтарной кислоты, 0,1% К2НР04, 0,03% MgS04-7H20 и 0,1% муки из горошка, нри рН 5,2 (с ПОМОЩЬЮ раствора аммиака) засезают десят} дневиую культуру щтамма Clav.ccps paspali Stev. et Hall, получеиную в присутствии картофеля-глюкозы-агара. После 7-10 дней выращивания во встряхиваем й склянке при температуре 27°С в темноте нри относительной влажности 86-90-ь получают неоднородную культуру, 10% которой засевают па ту же нитательиую среду и выращивают еще 4 дня. 10% полученной культуры засевают на питательную среду для получения алкалоидоз. Среда содержит 5% маннитола, 3% янтарной кислоты, 0,1% К2НРО4, 0,03% AlgSOi-71-120 (рН доводят до 5,2 водным раствором аммнака). Через 7-9 дпей концентрация алкалоидов достигает 1000 мкг;мл. 10 л полученной среды фильтруют для тделения мицелия, подщелачивают раствором углекислого натрия или едкого натра и экстрагируют 10 л смеси хлОроф -рма с изобутанолом (4:1). Полученный эксгракт обрабатывают 2%-ным раств ром виннокаменной кислоты, упаривают до 0,1 первоначальпого объема, подщелачивают, экстрагируют хлороформог и упаривают досуха. Прилученный белый крИСталлический норощок подвергают щелочнО Му гидролизу и выделяют лизергиновую и пзолизергиковую кислоты общепринятыми приемами.

Пример 2. При тех же условиях, которые оиисаны в примере I, но с использованием в составе питательной среды вместо янтарной кислоты яблочп Г, зиннокамеиной, .чимоиной, малеиновг й или уксуской кислот получают алкалонды с тем же выходом (вместо маннитола может быть также использоваи сорбито;;).

Пример 3. При условиях, описанных в примере 1, но при использовании питателыю среды, содерж.и|ей 4°, манн:1тола, 1 % г/пок зы, 2% янтарной кислоты, 0,1% К2НРО4, 0,03% MgS04-7H20 получают алкалоиды с выходом 1400-1GOO мкг:мл (в качестве источника аз- ткого питаиия муки могут быть также иогользованы соя, земляные орехи, бобы, картОфель, гидролизованный казеин, экстракт дрожжей, вытяжки из зерна и т. п.).

Пример 4. Брожение осуществляют в стекляииых ферментерах (соотисшение их высоты к дназлетру не .менее 3:1) емкостью 4 л. В состав питательной среды входит 5% маннитола, Э% янтарной кислоты, 0,1% KiliPO:, 0,03;;) семиводиого сернокислого магн::я. Раствором ам.миака рП доводят до 5,2. Стерилизацию нр0113зодят в автоклаве в тече}1ие 20 л;ин при 100°С и 40 .-;:ыя при 20С. Воздух подают со дгта по стекляиноГ трубке. Засевают среду 400 мл культуры, нрнгот влениой, как описано в примере 1. Через 4-G дней конце гграц;1я алкалоидов в среде достигает i400- -i600 мкгмл. Такой же :ысокий вы.ход целевого продукта получают и при использозании больщих ферментеров нз нержавеющей стали, вмещающих 50 л питательной- среды.

Предмет изобретения

Способ получения производных лизергпновои н изолнзергановой кислот путем глубинной ферме;1тании культуры Claviceps на искусственных питате; ьных средах, о т л н ч а га ол, н Il с я тем. что используют штамм гриба Claviceps paspali Siev. et Hal, которы предварительно вырагннвагот на зародыц)ах ржи.

- 3 -Лэ 159469