СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЫНЬИ Советский патент 1971 года по МПК C12P33/20 

1 L

Изобретение относится к области медицины и, в частности, касается получения алкалоидов спорыньи.

Известен способ получения алкалоидов спорыньи, например аргокорнина и эргозина, путем глубинной ферментации культуры рода Claviceps в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при температуре до 30°С и кислой среде с последующим выделением целевого продукта.

Предложенный способ характеризуется использованием штамма Claviceps purpurea F. L. 43/14. Культура образует колонии более или менее извитых гифов толщиной 3-4 мк. Гифы разветвлены слабо; некоторые ответвления поднимаются.

Надземные гифы, контактируя с воздухом, могут образовывать конидии. Однако в большинстве сред они отсутствуют. Мицелий погруженных в воду культур имеет вид пучков гифов, состоящих из очень неравномерных клеток толщиной от 3 до 10 мк. Когда клетки набухают и становятся округленными, гифы выглядят подобно нитке бус и могут образовывать конидии.

3,5-6. В качестве источника углерода можно использовать глюкозу, сахарозу, маннит, сорбит, глицерин, лимонную кислоту, янтарную кислоту; в качестве источника азота - аммиак, аспарагин, пептон, казеин, продукты гидролиза (гидролизаты) и соли аммония, такие, как сульфат аммония, хлорид аммония и другие, минеральные соли - хлориды, фосфаты, сульфаты, магний, железо, цинк, марганец, калий.

Пример I. Исходную культуру, выращенную на питательной среде Cz4M (содержит 40 г глюкозы, растительного жидкого экстракта 1 г (NH4)2-HPO4 5 г, 1 г,

MgSO4-7H2O 2,5 г КС1 0,5 г, FeSO4 7Н2О 10 мг, ZnSO4-7H2O 10 мг, агара 18 г, дистиллированную воду до 1000 с.и), переносят на скошенный агар той же питательной среды, инкубируют 10 дней при 28°С, и полученную культуру используют для инокуляции двух колб емкостью до 300 см.

Каждая колба содержит 50 с.из питательной среды следующего состава: L-аспарагин

10 г, К2НРО4 0,5 г, MgSOi 7Н2О 0,3 г, дрожжевой экстракт 0,1 г, FeSO4-7H2O 7 мг, ZnSO4 7Н20 6 мг, сахароза 100 г, дистиллированную воду до 1000 CMS. Добавляют гидрат окиси натрия до рН 5,2. Колбы инкубирувстряхивании. 10% полученных культур используют для инокуляции колб емкостью 300 CMS, содержаших 50 сдгз среды 668 следующего сотава: сахароза 60 г, глицерин 60 с-и-, глюкоза 80 г, дрожжевой экстракт 0,1 г, ли-5 монная кислота 15 г, КС1 0,125 г и дистиллированная вода до 1000 сжз; рН 6,2. Культуру инкубируют 12-14 дней и получают 950 смеси алкалоидов, включающих 45% эргозина и 55 эргокорнина. Далее смешивают ию фильтруют содержимое 120 колб, включающих от 950 до 1100 у/см смеси алкалоидов. Фильтрат и мицелий экстрагируют отдельно. Фильтрат, объем которого доводится до 5 л при рН 9, дважды экстрагируют, каждый раз 15 путем добавления 3 л хлороформа. Мицелий разбавляют 50%-ным водным раствором ацетона, содержащим 20% винной кислоты, и фильтруют, к фильтрату добавляют карбонат натрия до рН 9, и затем фильтрат триж-20 ды экстрагируют хлороформом. Экстракты смещивают и выпаривают в вакууме при 20-30°С до 1,5 части от первоначальпого объема, после чего экстрагируют 2%-ным раствором винной кислоты. Получен-25 ный раствор подщелачивают до рН 9 и экстрагируют хлороформом, экстракт выпаривают и сырой продукт добавлепием гексана. Сырой продукт высушивают, затем растворяют в небольшом объеме хлороформа и пропускают через колонку, наполненную 400 г силикагеля. При элюировании хлороформой получают фракцию, содержащую эргокорнин, которая высушивается при обычпых условиях. Остаток растворяют в бензоле в соотношении 1-20, концентрируют до получения /4 части исходного объема, выдерживают одну ночь при 5°С и получают 2,5 г эргокорнина, который перекристаллизовывают из метилового спирта. Проводят элюировапие полученпого продукта, пропуская через колонку с двуокисью кремния, хлороформом и 4% метанола, и получают вторую фракцию, содержащую 2,1 г эргозина. Предмет изобретения Способ получения алкалоидов спорыньи, например эргокорнипа и эргозина, путем глубинной ферментации культуры рода Claviceps в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральпые солп, при температуре до 30°С и кислой среде с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что используют штамм Claviceps purpurea F. L. 43/14.