Штамм бактерий РSеUDомоNаS pSeUDoaLcaLIGeNeS, используемый для очистки сточных вод от ароматических соединений Советский патент 1990 года по МПК C02F3/34 C12N1/20 C02F3/34 C02F101/30 C02F103/36 

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и касается выделения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки промышленных сточных вод, содержащих ароматические соединения, например сточных вод предприятий органического синтеза.

Целью изобретения является получение штамма бактерий Pseudomonas pseu- doalcaligenes ВКПМ- 43 7 (MV II) , способного разрушать амино- и нитроаро- матичёские соединения в концентрации до 3 г/л, имеющего широкий спектр де- структ 1вной активности по отношению

к фенолам, а также окси- и диоксибензойным кислотам.

Штамм выделен из образца почвы, взятого на территории бытовой химчистки, и получен методом прямого высева почвенной суспензии на синтетическую среду следующего состава, г/л:

Na.,HP04

NaCl

2-Нитробензоат

Агар-агар

HiO

рН

6

3

0,5

0,5

15

До 1

7,0±0,2

&д

20

25

Посев инкубировали в течение 72 ч ри IS-SO C, отбирали наиболее крупые колонии, которые.проверяли на спообность утилизировать 2-нитробензой- ную кислоту в жидкой питательной срее того же состава баз агар-агара. Изменение содержания в среде ароматического субстрата контролировали с помощью УФ-спектрофотометрии при не волны 268,2 нм.

Штамм хранят при i С на столбиках с 0,75 МПа или синтетической средой следующего состава, %i 2-нитробензой- ная кислота 0,2; ЫаНРОг 0,6; КН..,Р04. t5 0,3; NaCl 0,05. Пересев- 2 раза в ГОД. Штамм сохраняет активность после двух лет хранения в лиофильно высушенном состоянии с использованием обезжиренного молока в качестве криопро- тектора.

Штамм имеет следующую характерисику.

Культурально-морфологические признаки.

Клетки после 18-24 ч выращивания - мелкие, подвижные, грам отрицательные палочки, расположенные одиночно.

После 48-72 ч инкубации к. полиморфизму: в мазках клетки разных размеров, расположенные попарно или короткими цепочками. Спор и капсул не образуют.

На синтетических минеральных средах с ароматическими соединениями колонии после 72 ч культивирования при овальные, гладкие, плоские с ровными краями, диаметром 2-3 мм, полупрозрачные в проходящем свете. Колонии на мясопептонном агаре ровные, гладкие, овальные, полупрозрачные, диаметром 3-4 мм через 48 ч инкубирования. На мясопептонном бульоне при инкубации в течение 48 ч наблюдается равномерное помутнение среды.

физиолого-биохимические признаки. Отношение к источникам углерода: используют ацетат, сукцинат, пируват, глюко зу, глутамин и глутаминовую кислоту, цитрат.

Проявляет высокую деструктивную активность по отношению к амино- и нитропроизводным соединениям ароматического ряда, а также к соединениям ряда фенола, окси- и диоксибензойным кислотам.

Отношение к источникам азота: ис- .пользуют соли аммония, нитро- и ами-, ноароматические соединения.

30

35

45

50

55

0

5

5

0

35

Оксидазо- и каталазоположителен. Желатиназу, фенилаланиндезаминазу,° аргининдигидролазу, амилазу, уреазу, ДНК-азу не образует. На среде Хью- Лейфсона с глюкозой, сахарозой, ара- бинозой, лактозой, ксилозой, маннитом, мальтозой, рамнозой, фруктозой, сорбитом наблюдаются подщелочение среды. Пигментов на средах Кинг А и Кинг Б не образует.

На кровяном агаре гемолиза эритроцитов не вызывает.

Отношение к антибактериальным препаратам: устойчив к эритромицину, ле- вомицетину, стрептомицину, линкомици- ну, олеандомицину, рифамицину, чувствителен к мономицину, канамицину.

Непатогенен: при внутрибрюшинном заражении белых мышей (1 О животных на пробу) взвесью суточной агаровой культуры штамма в концентрации 1 млрд.кл/мл в объеме 0,5 мл признаков заболевания не обнаружено, срок наблюдения 7 дней.

Рост в диапазоне рН 6-9, оптимум 7+0,2.

Температурный диапазон роста 20 - , оптимальная область 28-30 С.

.Осуществляет деградацию ароматических соединений в условиях аэрирования, при ограниченном аэрировании разложение ароматических соединений идет в.3-4 раза медленнее.

П .р и м е р 1. Посевной материал выращивали на качалке (1200 об/мин) в течение 72 ч при на среде следующего состава, г/л:

45

50

6;

55

3; NaCl 0,5; 2-нитробензоат 0,5; агар 1,5; вода до 1 л; рН 7,2.

Выращенным посевным материалом инокулируют среду следующего состава, г/л: Na2HP04 6; 3; NaCl 0,5; 2-нитробензойная кислота 3,0; вода

до 1 л; рН 7,1.

Посевная доза 10 кл/мл. Выращивание проводят в колбе Эрленмейера объемом 250 мл, содержащих 100 мл среды, при 30°С, О способности штамма разрушать 2-нитробензойную кислоту судят по уменьшению ее концентрации в среде с использованием спектро- фотометрии в УФ-области при 268,2 нм.

После 144 ч иню/бации концентрация 2-нитробензойной кислоты снизилась на 83,.

П р и м е р 2. Условия аналогичны описанным в примере 1 за исключением того, .что в инкубационный состав среды вводят 2 г/л 4-аминобензойной кислоты в качестве источника углерода и азота.. После 12 ч инкубирования содержание -амино6ензойной кислоты уменьшено на 98.

П р и м е р 3. Условия, как в примере 1, за исключением того, что в состав ин субационной среды вводят в качестве источника углерода и азота 2-аминобензойную кислоту в концентра- ции 250 мг/л.

После 72 ч инкубирования 2-амино- бензойная кислота разрушена на

П р и м е р 10. Условия выращивания штамма, как в примере 1, за исклю чением того, что штамм инкубируют на сточных водах производства фенола и ацетона. В органической фракции сточП

иная кислота РазРУшена на .о. Г, ;-содержится 8 соединений аро- р и м е р i. Условия, как в при is ,,., „„, Гопеожание Фенола

20

мере 1, за исключением того, что в состав инкубационной среды в водят 1 г/л хлористого аммония и 250 мг/л фенола .в качестве источника углерода. После 120 ч инкубирования фенол разрушен на 91,3.

П р и м е р 5. Условия, как в примере , за исключением того, что в среду в качестве источника углерода добавляют 0,5 г/л фталевой кислоты. После 120 ч инкубации штаммом разрушено 73% фталата.

П р и м е р 6. Условия аналогичны, описанным в примере ч за исключением того, что в среду вводят в-качестве источника углерода 0,5 г/л 2-оксибен- зойной кислоты. После 120 ч инкуЬиро- вания штаммом разрушено 99,3-0 2-окси- бензойной кислоты.

П р и м е р 7. Условия, как в примере k, за исключением того, что в среду вводят в качестве источника углерода 0,5 г/л 2,4-диоксибензойной кислоты. После 120 ч инкубирования штаммом разрушено 2 ,-дио.ксибен- зойной кислоты.

П р и м е р 8. Условия, как в примере , за исключением того, что в качестве источника углерода в среду вводят 0,5 г/л бензойной кислоты. После 120 ч инкубации штаммом разрушено 72,3% .бензойной кислоты.

матического ряда. Содержание фенола составляет 325 мг/л. Суммарная концентрация остальных 7 соединений составляет 350 мг/л.

Деструктивную активность штамма оценивают по уменьшению оптической плотности в области 270 нм (область поглощения, при которой оценивают суммарное содержание соединений аро- 25 матического ряда).

Кроме того, деструктивную активность штамма в сточных водах контролируют при помощи реакции с ноантипирином и тонкослойной хромато графии .

После сут культивирования концентрация фенола уменьшается на 95,3 суммарная концентрация остальных аро матических соединений - на 98,1%.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что с помощью штамма Pseudomonas pseudoalcaligenes возможна эффективная очистка сточных вод, содержащих широкий спектр ароматических соединений.

30

35

40

Формула из

обретений

Штамм бактерий Pseudomonas pseudo alcaligenes ВКПМ , используемы для очистки сточных вод от ароматических соединений.

,Q

П р и м е р 9. Условия,, как в примере 4, за исключением того, что в качестве инкубационной среды используют сточные воды химкомбинатаг, в ко- S торые вводят 2-нитробензойную кислоту в концентрации 3 г/л. После V i ч инкубации 2-нитробензойная кислота разрушена штаммом на 80,3.

П р и м е р 10. Условия выращивания штамма, как в примере 1, за исключением того, что штамм инкубируют на сточных водах производства фенола и ацетона. В органической фракции сточ Г, ;-содержится 8 соединений аро- is ,,., „„, Гопеожание Фенола

Г, ;-содержится 8 соединений аро- ,,., „„, Гопеожание Фенола

0

матического ряда. Содержание фенола составляет 325 мг/л. Суммарная концентрация остальных 7 соединений составляет 350 мг/л.

Деструктивную активность штамма оценивают по уменьшению оптической плотности в области 270 нм (область поглощения, при которой оценивают суммарное содержание соединений аро- 5 матического ряда).

Кроме того, деструктивную активность штамма в сточных водах контролируют при помощи реакции с ноантипирином и тонкослойной хроматографии .

После сут культивирования концентрация фенола уменьшается на 95,3, суммарная концентрация остальных ароматических соединений - на 98,1%.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что с помощью штамма Pseudomonas pseudoalcaligenes возможна эффективная очистка сточных вод, содержащих широкий спектр ароматических соединений.

0

35

40

Формула из

обретений

Штамм бактерий Pseudomonas pseudoalcaligenes ВКПМ , используемый для очистки сточных вод от ароматических соединений.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается выделения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки промышленных сточных вод, содержащих ароматические соединения, например сточных вод предприятий ароматического синтеза. Целью изобретения является получение штамма бактерий PSEUDOMONAS PSEUDOALCALIGENES ВКПМ В-4347 (MV 11), способного разрушать амино- и нитроароматические соединения в концентрации до 3 г/л и имеющего широкий спектр деструктивной активности по отношению к фенолам, а также окси- и диоксибензойным кислотам. Штамм способен при выращивании на синтетической среде, содержащей 3 г/л 2-нитробензойной кислоты, после 144 ч культивирования разрушать до 83,7% этой кислоты. При содержании в среде 2 г/л 4-аминобензойной кислоты деструктивная активность штамма после 72 ч инкубирования составляет 98%.