Способ получения растений-регенерантов картофеля из протопластов Советский патент 1990 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, клеток, а также протопластов, и может быть использовано для нужд генетики и селекции в сельском хозяйстве.

Целью изобретения является ускорение процесса получения растений-регенеран- тов и увеличение их выхода.

Способ состоит в том, что выделенные из растений протопласты помещают в твердую питательную среду. В качестве питательной среды используют, например среду SW. Через 7-10 дней твердую питательную среду с образовавшимися колониями переносят в жидкую среду СТ 1, Культивируют колонии на свету при постоянном перемешивании. Через 7-10 дней питательную среду СТ 1 меняют на жидкую регенерационную среду СТ 2. Обновление среды СТ 2 производят каждые 7-8 дней. Из индивидуальных колоний, возникших в результате деления протопластов, при таких условиях культивирования на указанной питательной среде через 15-20 дней формируются побеги.

Использование твердой питательной среды в начальный период процесса существенно повышает эффективность деления клеток. Первые деления их наблюдают уже на 2 - 3-й день культивирования. Последующее использование жидкой питательной среды при постоянном перемешивании позволяет ресуспендировать твердую среду и высвободить образовавшиеся клеточные колонии. Дальнейшее использование жидких питательных сред позволяет существенно сократить процесс регенерации растений (до 15 - 20 дней) и устранить значительные трудности, которые имеют место при использовании твердых питательных сред в связи с пересадкой колоний.

П р и м е р 1. Берут жидкую питательную среду для протопластов, например, SW (стерилизуют фильтрованием) и добавляют в колбу с простерилизованной агарозой. КоО.

о

ю

44

ел

нечная концентрация агарозы в среде 0,6%. Среду подогревают до полного растворения агарозы. Свежевыделенные протопласты картофеля сорта Зарево помещают в капле питательной среды в чашку Петри. Постоянно перемешивая, добавляют 10 - 15 мл теплой (36 - 40°С) питательной среды, содержащей агарозу. Конечная концентрация протопластов 10 - 10 шт.в 1 мл среды.

Чашку Петри закрывают парафилмом. Культивируют на рассеянном свету (100 - 400 лк) при 24 - 25°С. Через 7-10 дней твердую питательную среду, содержащую клеточные колонии из 3 - 5 клеток, разрезают на блоки и помещают в жидкую среду СТ 2 в колбах. Культивируют колонии на свету (2000 лк) при постояннрм перемешивании. Через 7-8 дней среду СТ 1 меняют на жидкую среду СТ 2, которую обновляют каждые 7-8 дней, причем по.сле 10 - 14 дней культивирования колоний на этой среде наблюдают процесс регенерации растений. Колонии с образовавшимися побегами или отдельные побеги переносят для укоренения на среду МС без фитогормонов (табл.1).

увеличить выход растений-регенерантов. Сокращаются также затраты труда и средств в связи с исключением операции пересадки клеточных колоний на твердые среды (табл.2).

Формула изобретения

П р и м е р 2. Все приемы и последовательность действий аналогичны примеру 1, но используют среду с конечным содержанием агарозы 0,8% . Таким образом осуществляют регенерацию растений картофеля из протопластов., .

Предлагаемый способ позволяет cokpa- тить время регенерации растений картбфе- ля из протопластов примерно в 2 раза и

1.Способ получения растений-регене- 10 рантов картофеля из протопластов, включающий выделение протопластов, их культивирование на питательной среде и последующую регенерацию, отличающийся тем, что, с целью ускорения про 15 цесса получения рэстений-регенерантов и увеличения их выхода, культивирование протопластов осуще с-твляют путем помеще- ни:я их в твердую.агаризованную п йтатель- Hyfo среду с пр.следующим переносом и 20 образовавшихся из них клеточных колоний в жидкую питательную среду, а регенерацию осуществляют в жидкой питательной среде.

2.Способ по п. 1, отличающийся 25 тем, что в качестве твердой агаризованной

среды используют среду SW, в качестве жидкой - СТ 1, а регенерацию осуществля- йэт на среде СТ 2.;

3.Способ по л. 1,0 тличающийся 30 тем, что .культивирование клеточных колоний в жидкой питательной среде осуществляют при пострянном перемешивании.

4.Способ по п. 1,отличающийся тем, что в твердую питательную среду до3R упплпют агарозу в концентрации 0,6 - 0,8%.

Т а б л и ц а 1

увеличить выход растений-регенерантов. Сокращаются также затраты труда и средств в связи с исключением операции пересадки клеточных колоний на твердые среды (табл.2).

Формула изобретения

Продолжение табл.1

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии растений, и касается получения регенерантов картофеля из протопластов. Целью изобретения является ускорение процесса получения регенерантов и увеличение их выхода. Способ состоит в том, что выделенные протопласты сначала помещают на твердую питательную среду, затем образующиеся колонии переносят в жидкую среду и в жидкой же среде получают регенеранты. 3 з.п. ф-лы. 2 табл.

Таблица2