Способ получения бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам Советский патент 1991 года по МПК C12P19/04 C12P19/04 C12R1/125 

1

(21)4471130/13

(22)01.08.88

(46) 23.01.91. Бкш. I. 3

(71)Институт микробиологии и вирусологии им. Л.К.Заболотного

(72)В.С.Подгорский, Э.А.Коваленко, И.А.Симоненко и В.М.Лахтин

(53)547.9(088.8)-

(56)Лахтин В.М.Лектины в исследовании белков и углеподов./Итоги науки и техники, ВИНИТИ: Биотехнология, 1987, с. 288.

Бондарчук А.А., Ажмцкий Т.Ю. Характеристика ферментативного комплекса из Вас.mesentericus.-Микробиологический журнал, 1981, 40, 6,с.687-690.

(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЛЕКТИНА, СПЕЦИФИЧНОГО К СИАЛОВЬт КИСЛОТАМ

(57)Изобретение относится к микро- биологической промышленности,а именно

к способу получения бактериального лек- тина, специфичного к сиаловым кислотам. Цель изобретения - упрощение способа получения бактериального сиало- специфического лектина, а также увеличение выхода целевого продукта. Сущность изобретения заключается в том, что, в качестве источника сырья используют непатогенную культуру Baccil- lus mesentericus ВКПМ В-2466, способную синтезировать внеклеточные сиало- специфичные пектины. Продуцент выращивают в течение 14-16 ч глубинным способом на полусинтетической среде с биостимулятором - лвтолизатом из пивных дрожжейi Целевой продукт с выходом 46,8-602 получают осаждением культуралыюй жидкости сульфатом аммония при насыщении 60-70%, диализом и хранят в замороженном состоянии при -10°С. 1 з.п.ф-лы.

2

(Л

с

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения бактериального лек- тина, специфичного к сиаловым кислотам.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа.

В качестве источника сырья используется непатогенная культура Baccil- lus mesentericus ВКПМ В-2466, у которой обнаружена способность к биосинтезу внеклеточных сиалоспецифичных лектинов. Продуцент выращивается глубинным способом на среде, содержащей в качестве биостимулятора предпочтительно автолизат из пивных дрожжей, что сокращает время культивнро- вания до 14-16 ч по сравнению с 21- 24 ч выращивания на среде, содержащей автолизат из хлебопекарских дрожжей. Препарат выделяют осаждением сернокислым аммонием при насыщении 60-70% и очисткой диализом, хранят в замороженном состоянии при -10 С. Выход целевого продукта 46,8% - 60%. Пример 1. Бактерии Bacil- kus mesentericus ВКЛМ В-2466 выращивают глубинным способом на качалках (160 об./мин) в течение 21-24 ч при 37°С в колбах Эрленмейера со 100 мл питательной среды следующего

состава, г/л: желатин 10,0, КНгРО 1,6, MgS04 0,75, ZnS04 0,25, FeSO4 l7HeO 0,02, Nad 0,02, (NH4)2 S04 0,05, CaCl2 0,08, мальтоза 1,0, an- толизат из хлебопекарских дрожжей 1,5. Бактериальную биомассу отделяют центрифугированием при 6000 g в течение 20 мин. К культуральной жидкости (1 л) прибавляют 242,03 г (NH4)4S04 №0% насыщения) и оставляют на ночь при 4°С. Выпавший хлопьевидный осадок отделяют центрифугированием при 6000 g в течение 25 мин, растворяют в 5 мл дистиллированной воды и диализуют 6-8 ч против водопроводной воды при комнатной температуре, затем ночь - против дистиллированной воды при А°С, осадок отделяют центрифугированием при 8000 в в течение 15 мин, супернатант хранят в замороженном состоянии при -10еС. Выход целевого продукта по активности 2,6%.

Пример 2. Условия выращива- ния, питательная среда и выделение бактериального лектина аналогичны приведенным в примере 1, за исключением сульфата аммония, используемого для осаждения препарата: на 1 л культуральной жидкости (КЖ) 390,0 г ( (60% насыщения). Выход целевого продукта по активности 16,1%

Пример 3. Условия выращивания, питательная среда, выделение бактериального лектина такие же, как в примере 1, за исключением количества сульфата аммония, используемого для осаждения лектина: на 1 л КЖ добавляли 472,0 г (NH4) (70% насыщения). Выход целевого продукта по активности 33,0%.

Пример 4. Условия культивирования продуцента и выделение лектина (40% насыщения сульфатом аммония) аналогичны приведенным в примере 1 В питательной среде в качестве биостимулятора вместо автолиэата из .

хлебопекарских дрожжей использовали автолизат из пивных дрожжей из такого же расчета. На 14-16 ч роста продуцента из культуральной жидкости (после отделения биомассы) проводили выделение сиалоспецифичного лектина, как описано в примере 1. Выход целевого продукта по активности 2,2%.

Пример 5. Условия выращивания и питательная среда с автолиза- том из пивных дрожжей аналогичны приведенным в примере 4. Для осаждения препарата из 1 л КЖ использовали 390,0 г сернокислого аммония (60% насыщения). Выход целевого продукта по активности 46,8%.

Пример 6. Условия выращивания и питательная среда с автолизатом из пивных дрожжей такие же, как и в примере 4. Для осаждения сиалоспецифичного бактериального лектнна из 1 л ЮК использовали 472,0 г сернокислого аммония (70% насыщения). Выход целевого продукта по активности 60%.

Дальнейшее увеличение процента насыщения (Ш4)г804 не ведет к увеличению выхода целевого продукта. Формула изобретения

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что при осаждении используют сернокислый аммоний при степени насыщения 60-70%.