ГИДРАЗОН-4-АМИЛОКСИ-3-НИТРОАЦЕТОФЕНОНА, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИМУТАГЕННУЮ АКТИВНОСТЬ Советский патент 1996 года по МПК C07C251/86 A61K31/15 

Изобретение относится к производным гидразона, в частности к новому гидразону 4-амилокси-3-нитроацетофенона формулы
C₅H-NH₂ проявляющему антимутагенную активность, который может быть использован в различных областях народного хозяйства, в частности при работе с химическими мутагенами на производстве, в онкологии при использовании цитостатиков, при использовании химиотерапевтических и фармакологических средств, обладающих мутагенной активностью.

Цель изобретения выявление в ряду гидразонов ацетофенона нового соединения, проявляющего антимутагенную активность и обладающего низкой токсичностью.

П р и м е р 1. 4-Амилоксиацетофенон.

К 16,4 г (0,1 моль) амилоксибензола при перемешивании и охлаждении льдом добавляют 10 г безводного хлористого алюминия и при 2-4^оС в течение 1 ч прикапывают 8,6 г (0,11 моль) хлористого ацетила. Смесь перемешивают при этой температуре 1 ч, 3 ч при 40^оС и оставляют на ночь. Затем при охлаждении смесь разлагают водой, выделившееся масло экстрагируют эфиром, эфирные экстракты сушат сернокислым натрием. После отгонки растворителя остаток перегоняют в вакууме. Выход 11 г (53,4%), т.пл. 31-32^оС, т.кип. 140-142^оС 1 мм рт.ст. R_f 0,66.

Найдено, С 75,80; H 9,00.

C₁₃H₁₈O₂
Вычислено, С 75,69; Н 8,80.

ИК-спектр,ν, см^-1: 1680 (СО), 1600, 1575 (ароматика).

П р и м е р 2. 4-Амилокси-3-нитроацетофенон.

К раствору 12,4 г (0,06 моль) 4-амилоксиацетофенона в 23 мл серной кислоты при перемешивании и охлаждении до (-5)-(-8)^оС в течение 2 ч прикапывают 2,4 мл азотной кислоты ( d204

Найдено, C 61,81; H 7,13; N 5,50.

C₁₃H₁₇NO₄
Вычислено, C 62,14; H 6,82; N 5,57.

ИК-спектр,ν, см^-1: 1680 (CO), 1620, 1575 (ароматика), 1305, 1540 (NO₂).

ПМР-спектр (пиридин-d₅), δ м.д. протоны бензольного кольца 8,45 д (1Н, J= 2 Гц); 8, 10 д-д (1Н, J₁=2 Гц, J₂=8 Гц); 7,13 д (1Н, J=8 Гц); 3,96 т (2Н, OCH₂); 2,43 c (3H, CH₃); 1,83-0,43 м (9H, C₄H₉).

П р и м е р 3. Гидразон 4-амилокси-3-нитроацетофенона (1).

Смесь 6 г (0,024 моль) 4-амилокси-3-нитроацетофенона, 5,0 г (0,1 моль) гидрата гидразина и 50 мл метанола кипятят 5-6 ч. Затем большую часть растворителя отгоняют в вакууме водоструйного насоса и добавляют воду. Выпавшее масло при стоянии кристаллизуется, осадок растворяют в 30 мл метанола при нагревании, охлаждают, нерастворимую часть отфильтровывают. Из фильтрата удаляют метанол и добавляют воду. Осадок отфильтровывают. Выход 4,3 г (67,6% ), т.пл. 50-52^оС, R_f 0,62.

Найдено, C 58,60; H 7,22; N 15,84.

C₁₃H₁₉N₃O₃
Вычислено, C 58,85; H 7,22;N 15,84.

ИК-спектр, ν см^-1: 3355, 3300, 3220 (NH₂), 1685 (C=N, плечо), 1610, 1590 (ароматика), 1335 (NO₂).

ПМР-спектр (дейтерометанол), δ, м.д. протоны бензольного кольца 8,03 д (1Н, J=2 Гц); 7,83 д-д (1Н, J₁=2 Гц, J₂=10 Гц); 7,17 д (1Н, J=8 Гц); 4,10 т (2Н, ОСН₂); 2,10 с (3Н, СН₃); 2,0-0,70 м (9Н, С₄Н₉).

Гидразон 4-амилокси-3-нитроацетофенола (соединение I) представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в метаноле, этаноле, эфире, хлороформе, нерастворимое в воде, гексане.

Антимутагенное действие соединения I и контрольных протекторов гидрохлорида 2 -меркаптоэтиламина (МЭА) и цистамина изучают на биохимических мутантах Escherichia coli P-678 (получен их Ереванского филиала ВНИИгенетика), Actinomyces rimosus 222 (получен из ВНИИантибиотиков) и на индикаторных штаммах Salmonella typhimurium, несущих мутации типа замены основания в молекуле ДНК: TA 1535 генотип his 46, LPS^-, rfa, UVR и ТА 1950 генотип his 46, LPS⁺, ΔUVRB (получены из НИИ пл БИХС, оригинатор штаммов доктор Б. Эймс, США). Штаммы тест-культур ауксотрофны соответственно по треонину, лизину и гистидину.

Антимутагенное действие исследуемых соединений изучают методом доза эффект по следующим направлениям: влияние на возникновение спонтанной мутации, на мутации, индуцированные химическим мутагеном, и на мутации, индуцированные ультрафиолетовым (УФ) излучением. УФ-облучение проводят бактерицидной лампой низкого давления БУФ-30 на расстоянии 60 см от источника излучения при комнатной температуре при постоянном перемешивании объекта в затемненном боксе при красном свете. При комбинированном действии на тест-объект (антимутаген + мутаген или УФ-лучи) один вид обработки непосредственно следует за другим. Контролем служат спонтанная частота обратных мутаций (ревертанты) и частота мутаций, возникших при УФ-облучении микроорганизмов. Метаболическое превращение соединения I на штамме сальмонелл ТА 1950 изучают по методике Маллинга, модифицированной Фронштейном с соавторами.

Острую токсичность изучают на белых беспородных мышах путем однократного внутрибрюшинного введения. На каждую дозу соединения используют по пять мышей, для этой цели используют 40 мышей. Наблюдения за животными ведут в течение одной недели. ЛД₅₀ соединения I определяют методом Беренса. ЛД₅₀, соединения I равна 450 мг/кг, МЭА 350 мг/кг, цистамина 320 мг/кг.

Результаты изучения антимутагенной активности соединения I и контрольных протекторов в отношении кишечной палочки и актиномицетов приведены в табл. 1, из данных которой видно, что соединение I оказывает атимутагенное действие, снижая число спонтанно возникших мутаций соответственно на 36 и 32%
Результаты изучения влияния соединения I и контрольных протекторов на мутации, возникшие спонтанно у штамма сальмонелл ТА 1535, представлены в табл. 2, из данных которой видно, что соединение I оказывает антимутагенное действие и в отношении штамма сальмонелл 1535, уменьшая при высокой выживаемости клеток сальмонелл число спонтанно возникающих мутаций на 29% по сравнению с контролем и оказывая примерно такое же защитное действие, как контрольные протекторы.

Изучено влияние соединения I на мутации, индуцированные химическим мутагеном 2722 [гидрохлорид 3-(3-хлор-4-пропоксифенил)-5,6-дигидроимидазо [2,1-b] тиазола] Результаты изучения комбинированного действия соединений в отношении тренинового локуса кишечной палочки приведены в табл. 3.

Результаты комбинированного опыта показывают, что под влиянием соединения I мутагенная активность мутагена 2722 примерно вчетверо уменьшается по сравнению с первоначальной активностью.

Изучено влияние соединения I на мутации, индуцированные УФ-лучами у кишечной палочки и актиномицетов. Полученные результаты приведены в табл. 4, из которой видно, что соединение I оказывает заметное защитное действие, снижая число мутаций, индуцированных УФ-лучами, соответственно на 55 и 53%
Результаты изучения влияния соединения I и циклофосфана на возникновение мутаций у штамма сальмонелл ТА 1950 в обычных условиях (А) и в условиях метаболического превращения (Б) представлены в табл. 5.

Как видно из данных табл. 5, соединение I, подвергаясь метаболическому превращению, не лишается антимутагенной активности. Его активность увеличивается до 38,5% вместо первоначальных 28% Противоопухолевый препарат циклофосфат, наоборот, из немутагенного превращается в мутагенный, индуцируя мутации в 4,6 раз больше контроля. Циклофосфан испытывается с целью контроля активности применяемой гомогенатной смеси печени крыс линии "Вистар". Приобретение циклофосфаном мутагенного действия в этих опытах одновременно указывает на активность используемой гомогенатной смеси.

Таким образом, соединение I являясь малотоксичным, обладает заметным антимутационным действием в отношении взятых в опыт бактериальных тест-систем, не уступая контрольным протекторам.

Изобретение относится к производным гидразона, в частности к гидразону 4-амилокси-3-нитроацетофенона, проявляещему антимутагенную активность. Цель - выявление соединений, обладающих указанной активностью. Получение ведут реакцией амилоксибензола с хлористым ацетилом в присутствии хлористого алюминия, нитрованием полученного 4-амилоксиацетофенона в 4-амилокси-3-нитроацетофенон с последующим взаимодействием последнего с гидратом гидразина. Выход 67,6%, т.пл. 50-52^oС, брутто ф-ла C_1 3H_1 9N₃O₃. 5 табл.

Гидразон 4-амилокси-3-нитроацетофенона формулы

проявляющий антимутагенную активность.