КОМПЛЕКС КРАУН-ЭФИРА ПИРИДАЗИНОВОГО РЯДА С ХЛОРИСТЫМ КАЛИЕМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИМУТАГЕННУЮ АКТИВНОСТЬ Советский патент 1995 года по МПК C07D498/04 C07F1/06 

Изобретение относится к новому соединению, а именно к комплексу нового краун-эфира -ди-(3'6'-диоксипиридазо)[1,2-a, h]-1,2,8,9-тетрааза-5,12-диоксациклотетрадек ан˙KCl формулы
· KCl проявляющему антимутагенную активность. Это соединение может найти применение в различных областях народного хозяйства и, в частности, при работе с различными химическими пpомышленными веществами, при использовании различных цитостатиков (в онкологии), химиотерапевтических и фармакологических средств, обладающих мутагенной активностью.

Предложенное соединение и его биологическая активность в литературе не описаны. Однако в литературе описаны родственные соединения, антимутагенная активность которых не изучена. В качестве антимутагенов широко известны 2-меркаптоэтиламин (МЭА), диметилсульфоксид (ДМСО), L-цистеин и тиомочевина. Однако названные соединения сравнительно слабые протекторы, действие их не универсально и ограничено отдельными тест-объектами.

Целью изобретения является изыскание нового, высокоактивного, слаботоксичного, устойчивого и удобного для применения антимутагена, а также расширение арсенала средств, воздействующих на живой организм. Указанные свойства определяются новой химической структурой нового соединения указанной формулы.

Комплекс краун-эфира синтезирован взаимодействием 3,6-диоксопиридазина с 3-окса-1,5-дихлорпентаном в присутствии гидроокиси калия по схеме
+ ^________→ · KCl
Индивидуальность полученного комплекса краун-эфира доказана ТСХ (Silufol UV-254, элюент пиридин-вода, 30:1, проявление ультрахемоскопом).

В ИК-спектре синтезированного соединения присутствуют полосы поглощения, характерные для карбонильной группы в области 1680 см^-1 и простой эфирной группы в области 1150 см^-1. Молекулярный вес определен масс-спектрометрическим методом.

П р и м е р. Ди-(3'6'-диоксопиридазо)[1,2-a,h]-1,2,8,9-тетрааза-5,12-диоксаци-клотетрадек ан˙KCl (1).

Суспензию 22,6 г (0,2 моль) 3,6-диоксопиридазина в 200 мл этанола нагревают до кипения и прибавляют раствор 1,2 г (0,2 моль) гидроокиси калия в 100 мл 75%-ного этанола. Смесь кипятят в течение 1 ч и медленно прибавляют 14,3 г (0,1 моль) 3-окса-1,5-дихлорпентана, кипячение продолжают в течение 10 ч. Затем прибавляют по каплям раствор 11,2 г (0,2 моль) гидроокиси калия в 100 мл 75%-ного этанола. Смесь кипятят в течение 1 ч и медленно прибавляют 14,3 г (0,1 моль) 3-окса-1,5-дихлорпентана. Кипячение продолжают 24 ч. Осадок отфильтровывают и отгоняют растворитель. Остаток растворяют в 100 мл воды и экстрагируют эфиром. Затем водный слой нейтрализуют соляной кислотой. Фильтруют от осадка, выпаривают досуха и прибавляют 100 мл абсолютного этанола. Выпавшие кристаллы фильтруют и сушат. Получают 22,0 г (50,2%) ди-(3', 6'-диоксопиридазо)[1,2-a, h] -1,2,8,9- тетрааза-5,12-диоксациклотетрадекана˙КСl (1) с т.пл. 238-240^о.

Найдено, С 43,56; Н 4,38; N 12,29.

C₁₆H₂₀N₄O₆˙ KCl
Вычислено, С 43,79; Н 4,57; N 12,56.

Изучена острая токсичность комплекса краун-эфира пиридазинового ряда с хлористым калием (1) и известных контрольных соединений. Результаты приведены в табл.1.

Как следует из табл.1, соединение 1 оказывает очень слабое токсическое действие (ЛД₅₀ равно 3000 мг/кг веса животного).

Антимутагенное действие комплекса краун-эфира. Антимутагенное действие изучено на биохимических штаммах: Escherichia coli Р-678, ауксотрофный по треонину, лейцину и витамину В₁; Actinomyces rimosus 222 (исходный штамм BS 21), ауксотрофный по лизину, и на индикаторных штаммах Salmonella typhimurium ТА-1534, несущий мутацию типа сдвига рамки считывания генетического кода, генотип his D 3051, LPS⁺, Repair Δuvr B; TA-1535, несущий мутацию типа заменены основания в молекуле ДНК, генотип his G 46, LPS^-, rfa, Repair Δuvr B и TA-1950, несущий мутацию типа замены основания в молекуле ДНК, генотип his G 46, LPS^+, Repair Δuvr B. Эти штаммы являются ауксотрофами по гистидину.

Антимутагенное действие исследуемого соединения изучали различными методами на указанных тест-объектах по разным направлениям. Результаты изучения антимутагенного действия исследуемого и контрольных соединений в отношении кишечной палочки и актиномицетов приведены в табл.2.

Как видно из табл.2, соединение 1 оказывает антимутагенное действие в отношении двух тест-объектов. Снижает частоту спонтанной мутации у кишечной палочки на 20% у актиномицетов на 27% Из контрольных препаратов антимутагенное действие оказали МЭА и ДМСО, остальные протекторы на этих штаммах оказались неактивными.

В табл.3 представлены результаты изучения антимутагенного действия соединения 1 и известных препаратов в отношении гистидинового локуса сальмонелл ТА-1534 с нормальным бактериальным липополисахаридом (LPS), служащим барьером проникновения веществ в клетки и ТА-1535 с разрушенным LPS. На штамм ТА-1534 очень слабое антимутагенное действие оказали лишь соединения 1 и МЭА. На штамме ТА-1535 соединение 1 оказало заметное антимутагенное действие, снизило частоту спонтанной мутации у сальмонелл на 57% и по активности превзошло контрольные протекторы.

Изучено влияние комплекса краун-эфира на мутации, индуцированные химическим мутагеном (см. табл.4). Из представленных в табл.4 данных видно, что заявленное соединение очень сильно снижает частоту встречаемости ревертантов, индуцируемых новым мутагеном N-(2-метил-4-изопропоксибензенсульфонил)-N'- бутилтиомочевиной (513076). Последний индуцирует мутации по треониновому локусу кишечной палочки в 3500 раз больше контроля. При совместном испытании этого мутагена с комплексом краун-эфира в 18 раз снижается выход мутаций индуцируемых мутагеном самостоятельно.

Результаты изучения антимутагенного действия соединения 1 и контрольных соединений в отношении кишечной палочки и актиномицетов, облученных УФ-лучами, приведены в табл.5. Из данных табл.5 видно, что соединение 1 оказывает сильное защитное действие по обоим локусам тест-объектов, снижает выход мутаций на 50 и 59% по сравнению с контролем. Соединение 1 по активности на актиномицетах заметно превосходит контрольные протекторы.

Соединение 1, изученное методом учета мутагенеза в системе с метаболической активацией на штамме сальмонелл ТА-1950 с нормальной бактериальной липополисахаридной системой, затрудняющей проникновение веществ в клетку, в небольшом проценте случаев оказывает антимутагенное действие.

Таким образом, на различных тест-объектах выявлено антимутагенное действие у комплекса краун-эфира. Это соединение снижает выход спонтанной мутации у кишечной палочки и актиномицетов соответственно на 20 и 27 у штамма сальмонелл ТА-1535 на 57% уменьшает число мутаций, индуцированных УФ-лучами на 50 и 59% Соединение 1 сильно влияет на мутации, индуцированные химическим мутагеном, снижает число ревертантов в 18 раз по сравнению с контролем. По антимутагенному действию и слабой токсичности соединение 1 превосходит известные протекторы, изученные в идентичных условиях.

Это соединение может найти применение в различных областях, и, в частности, при работе с различными химическими промышленными веществами, при использовании цитостатиков (в онкологии), химиотерапевтических и фармакологических средств, обладающих мутагенной активностью.

Комплекс краун-эфира пиридазинового ряда с хлористым калием формулы

проявляющий антимутагенную активность.