Питательная среда для выращивания белок А продуцирующих бактерий Советский патент 1995 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при получении микробного белка.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта.

Приготовление и использование среды иллюстрируется следующими примерами.

Ч/Приготовление компонента А - фермен.татйвно-кислотного гидроли- зата форменных.элементов крови крупного рогатого с кота (i&P С).

(3десь и далее в примерах гидролиза- ты будут обозначены как компоненты А и Б).

В ферментере готовят ферментационную смесь, для чего закачивают определенный объем (но не более половины объема ферментера) водопроводной воды, добавляют гидрокарбонат натрия 40- 44 г/л, панкреатин 30-40 г/л или поджелудочную железу 300-400 г/л, хлороформ 15-20 мл/л и перемешивают в течение 1-2 ч. Затем закачивают в ферментер форменные элементы крови КРС в соотношении 1;1 к объему ферментационной смеси, перемешивают в течение 1-2 ч, нагревают до 38-42°С. Ферментацию ведут 24-48 ч при 38-42°С и периодическом перемешивании до определенного содержания аминного азота в переваре. Затем подкисляют перевар до рН 3,0-3,5 центрированной соляной кислотой, прогревают 30-40 мин при 80-90°С, осветляют сепарированием, нейтрализуют 20%-ным раствором NaOH до рН 7,8-8,3, добавляют 3,0 г/л NaaHPCM и 2,33 г/л КН2Р04.

Приготовление компонента Б - фермен- тативно-кислотного гидролизата сыворотки |фови КРС.

В ферментере готовят ферментационную смесь, для чего в ферментер закачивают воду (не более половины его объема), добавляют гидрокарбонат натрия 40-44 г/л, панкреатин - 60-80 г/л, или гомогенизированную поджелудочную железу - 600- 800 г/л, хлороформ - 15-20 г/л и перемешивают в течение 1-2 ч. Затем закачивают в ферментер сыворотку или плазму крови КРС, осветленную сепарированием, в соотношении 1:1 к объему ферментационной смеси и нагревают до 42-45°С. Ферментацию ведут при 42-45°С и периодическом перемешивании в течение 2-6 суток до определенного содержания аминного азота в переваре. Подкисляют перевар -до рН 3,0- 3,5 концентрированной соляной кислотой, прогревают 30-40 мин при 80-90°С, осветляют сепарированием, нейтрализуют 20%- ным раствором NaOH до рН 7,8-8,3,

добавляют 3,0 г/л Ма2НРСм и 2,33 г/л КНгРСм.

Компоненты А и Б осветляют сепарированием, центрифугированием или фильтрэ- цией, разводят водопроводной водой до определенного содержания аминного азота, смешивают их в соответствующем соотношении, затем стерилизуют при 120-118°С 45 мин, добавляют 3-7 об.% этанола, 0,3-0,7 об.% 40%-ного стерильного раствора глюкозы и используют для культивирования микроорганизмов.

Пример 2. Приготовленные в соответствии с примером 1 компоненты А и Б 5 после осветления и разведения смешивают в объемных соотношениях, об.% 3:1, т.е. 69,0 об,% компонента А и 23,0 об.% компо нента Б и закачивают в ферментер. Смесь охлаждают до 38-40°С и добавляют 4,0 об.% 0 этанола и 0,3 об.% 40%-ного раствора глюкозы. В ферментере с питательной средой закачивают посевной материал - 10 об.% суточной бульонной культуры белок А продуцирующего золотистого стафилококка, 5 шт. Cowan-1 при концентрации микробных клеток 1 млрд/см . Культивирование ведут при 38-40°С, рН 6,8-8,2 в условиях аэрации и постоянного перемешивания.

Титр белка А, продуцированного в пита- 0 тельную среду, достигает не ниже 1:512 в реакции встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) со свиными иммуноглобулинами.

Пример 3. Готовят среду в соответствии с примером 2, но компоненты берут в 5 следующем объемном соотношении, об.%: Компонент А70,5

(3:1)

Компонент Б23.5

Этанол4,0

0 40%-ный раствор

глюкозы0.3

Посев материала и культивирование бактериальных клеток осуществляют, как в примере 2.

5 Титр белка А достигает в реакции ВИЭФ 1:512.

Пример 4. Приготовление питательной среды, посев бактериальных клеток и культивирование их осуществляют, как в 0 примерах 2 и 3, только в качестве продуцента белка А используют золотистый стафилококк штамм ГИСК № А676.

Накопление белка А в среде достигает в титре 1:512.

5 П р и м е р 5. Готовят среду в соответствии с примером 2, но компоненты берут в следующем объемном соотношении, об.%: Компонент А72,0

(3.1) Компонент Б24,0

Этанол4,0

40%-ный раствор

глюкозы0,3

Посев материала и культивирование бактериальных клеток осуществляют, как в примере 2.

Титр белка А в реакции ВИЭФ 1:512.

Кроме выращивания белок А продуцирующих золотистых стафилококков, предлагаемая питательная среда пригодна и для культивирования ряда других бактериальных клеток, что иллюстрируется следующими примерами.

Среда может быть использована также для культивирования микроорганизмов.

Пример 6. Для культивирования сальмонелл среду готовят в соответствии с примером 2, но компоненты берут в следующем объемном соотношении, об.%:

Компонент А70.5

(3:1)

Компонент Б23,5

Зтанол4.0

40%-ный раствор

глюкозы0,3

Во флакон вместимостью 500 см3, содержащий 200 см3 среды, вносят 20 см суточной бульонной культуры сальмонелл с концентрацией микробных клеток 1 млрд/см3. Культивируют при 37±1,0°С, рН 6.8-8,0 в стационарных условиях:

Через сутки культивирования концентрация микробных клеток составила 2.7 млрд/см .

Пример 7. Для культивирорания кзмпилобактерий среду готовят в соответствии с примером 2. но компоненты берут в следующем обьемном соотношении. об.%:

Компонент А70,5

(3:1)

Компонент Б23,5

Этанол4,0

40%-ный раствор

глюкозы0,3

Посев материала и культивирование бактериальных клеток осуществляют, как в примере 6.

Через сутки культивирования концентрация микробных клеток составляет 0,8 млрд/см3.

Приведенные примеры показывают, что предлагаемая питательная среда при определенных соотношениях компонентов А и Б пригодна для культивирования бактериальных клеток. В качестве контрольной среды для сравнительных испытаний, проводившихся одновременно, используют питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Установлено, что накопление бзкмассы стафилококка на предлагаемой питательной среде выше в 10-15 раз по сравнению с контрольной. Титр белка А в контрольной среде определяется не выше 1:16, на известной среде - 1:32, а на предлагаемой - 1:512.

Накопление биомассы сальмонелл на предлагаемой среде в 1,5-2 раза выше, кэм- пилобактерии накапливаются в 10-20 раз выше, чем на известной среде.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при получении микробного белка. Цепь изобретения - повышение выхода целевого продукта Для приготовления среды используют ферментативно-кислотный гидролиззт форменных элементов крови крупного рогатого скота (КРС) с содержанием аминного азота 500 - 600 мг% в количестве 69 - 72 об.% и фермента- тивно-кислотный гидоолизат сыворотки крови КРС с содержанием аминного азота 220 - 280 мг% в количестве 23,0 - 24,0 об.%. После стерилизации в смесь гидролизатов добавляют 4,0 - 7,0 об.% этанола и 0,3 - 0,7 об % 40%-ного раствора глюкозы. При выращивании штаммов стафилококков - продуцентов белка А последний накапливается в титре 1 : 512, при этом накопление бакмассы увеличивается в 10 - 15 раз Среда может быть также использована для накопления бакмассы широкого круга микроорганизмов.

Формула изобретения

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БЕЛОК А ПРОДУЦИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ, содержащая питательную основу, глюкозу и стимулятор роста, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве питательной основы она содержит ферментативно-кислотный гидроли- зат форменных элементов крови крупного рогатого скота с содержанием аминного азота 500 - 600 мг% и ферментативно-кислотный гидролизат сыворотки крови крупного рогатого скота с

содержанием аминного азота 220 - 280 мг%, в качестве стимулятора роста она содержит этанол, а глюкозу - в виде

40%-ного раствора при следующем количественном соотношении компонентов, об.%: ферментативно-кислотный гидролизат форменных элементов крови крупного рогатого скота с содержанием b аминного азота 500 - 600 мг% - 69,0 - 72,0; ферментативно-кислотный гидролизат сыворотки крови крупного рогатого скота с содержанием аминного азота

0 220 - 280 мг% - 23,0 - 24,0: 40%-ный раствор глюкозы 0,3 - 0,7: этанол 4 0 - 7,0.