Способ получения клеток костного мозга для цитологического исследования Советский патент 1991 года по МПК G01N1/28 A61B10/00 

1

(21)4254492/14 (22)01.06.87 (46)07.03.91. Бюл. №9

(71)Научно-исследовательский институт фармакологии Томского научного центра АМН СССР

(72)Е.Д.Гольдберг. В.П.Шахов и А.М.Дыгай (53)616-0.89.9(088,8)

(56)Grocker P., Gordon S. J. experimental medlcina. 1985, v. 162. p.993-1014,

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

(57) Изобретение относится к области меди-, цины. а именно к гематологии. Целью является увеличение выхода клеток костного мозга. Цель достигается тем, что костный мозг обрабатывается совместно с костью. При этом вначале его инкубируют с 0.1- 0,2%-ным раствором коллагеназы. а затем с 0.2-0,3%-ным раствором трипсина. После этого объект фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альдегида, что позволяет сохранить структуру гемопоэтических островков. Дополнительно удается получить качественные препараты с полным выводом клеюк костного мозга.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Целью изобретения явпяегся увеличение выхода клеток костного мозга.

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат костного мозга вместе с костью инкубируют при 37°С в 0,1-0.2%-ном растворе коллагеназы в течение 60 90 мин. Затем биоптат переносят в 0,2- 0,3%-ный раствор трипсина и инкубируют в нем при 37°С в течение 30-45 мин. Далее биоптат фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альдегида, что фиксирует межклеточные контакты, делает их более устойчивыми, не позволяет распадаться островкам на отдельные клетки. После такой подготовки препарата его механически разбивают на отдельные гемопоэтические остроаки. окрашивают гематоксилин-эозином и микроско- пируют.

Пример 1. Участок бедренной кости помещают в 1 мл 0.05%-ного раствора коллагеназы и инкубируют в нем при 37°С в течение 30 мин Затем переносят в 0,1%- ный раствор трипсина v инкубируют в нем при 37°С в течение 15 мин. После этого кость с находящимся в ней костным мозгом фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альдегида в течение 10 мин, затем из кости водой вымывают костный мозг и механически разбивают на фрагменты. Островки переносят на стекло и окрашивают в течение 30 мин азур-11-эозином.

При микроскопии препарата четко видны гемопоэтические островки клетки находятся во взаимосвязи.

Пример 2. Кость с костным мозгом помещают в 0,15%-ный раствор коллагеназы и инкубируют в нем при 37°С в течение 75 мин. Затем препарат переносят в 0.25%- ный раствор трипсина и инкубируют в нем в течение 40 мин при 37°С После зюго кость с мозгом фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альдегида в течение 10 мин. Из кости вымывают костный мозг, механически

1/1

С

о

GJ СО CJ

оо

его разбивают на фрагменты, готовят мазки и окрашивают гематоксилин-эозином. На

препарате четко видны островки, количество которых равно 5,8± 1,1. Известным способом можно было получить в этом опыте только 2,7± 1,6 островков.

Предложенный способ позволяет не только увеличить выход количества гемопо- этических островков, но и значительно улучшить качество препарата за счет получения сохранных клеток костного мозга. Полный выход клеток из костного мозга позволяет получить картину истинного содержания клеток кроветворной системы в костном мозге, что важно при изучении кроветворе0

5

ния в норме и при различных патологических состояниях системы крови.

Формула изобретения Способ получения клеток костного мозга для цитологического исследования путем их вымывания из костной ткани, инкубацией в среде, содержащей раствор коллагеназы, с последующей механической разбивкой и фиксацией, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода клеток, костный мозг после инкубации дополнительно обрабатывают 0.2-0,3%-ным раствором трипсина в течение 30-45 мин. при этом для инкубации используют 0,1-0,2%-ные растворы коллагеназы.