Способ получения препарата для перорального введения Советский патент 1991 года по МПК A61K9/52 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения препаратов для перорального введения ,

Целью изобретения является повышение стабильности препарата в желудочно-кишечном тракте.

Пример 1. К 10 мл вирусосо. держащей жидкости (вакцинный штамм БУК-628 вируса болезни Ауески свиней, исходный титр вируса 7,5 lg ТЦДуо А

концентрация белка 1%) добавляют 52- ный раствор соединительно-тканных белков в соотношении 1:4 при 20 С, тщательно перемешивают, вносят 1% полиакриловой кислоты, снова тщательно перемешивают, охлаждают, лио- филизируют, измельчают, высушивают . материал до частиц размером 0,1 мм или полученный гель измельчают до . гранул размером 1,0 мм и обрабатывают пылью таниина; Полученный препарат ин- инкубируют в течение 3-5 ч в желудочном соке свиней (рН 2,0). Затем доводят рН среды 7,5-8,5, инкубируют в течение 30 мин и титруют в культуре клеток почек поросенка СПЭВ. Титр вируса Бук-628 в этом случае определялся на уровне 3,5-4,0 lg ТЦЯ5о/л«М т.е. снижался на 3,5-4 порядка (в 1000 раз).

Пример 2. К 10 мл вирусосо- держащей жидкости (вакцинный штамм

ОЭ СО

sl

00

о

00

10

15

kБУК-628 вируса болезни Ауески свиней исходный титр вируса 7,5 lg ТЦД so/мл ) концентрация белка 1%) добавляют при перемешивании 5%-ный раствор соедини- тельно-тканных белков, затем 3%-ный раствор фталоилжелатины (м.м. 40- 60 тыс ., содержание связанных фтало- ильных групп 4-5%) в соотношении

1:0,5-0,5 при 20°С. Смесь охлаждают, лыэфилизируют и измельчают. Полуденный препатат после инкубации в течение 3-5 ч в желудочном соке (рН 2,0) слабощелочной среде (рН 7,5-8,5) в течение 30 мин титруют в культуре клеток СПЭВ. Титр вируса БУК-628 определяют на уровне 7,0-7,5 lg Т1Щ$0 т.е. он фактически не снижался после инкубации в желудочном соке. Повышение устойчивости вируса болезни Ауески, иммобилизованного таким образом, достигается на 3-4 порядка.

Пример 3. Выполняется по . примеру 2, только используют растворы различных концентраций исходного продукта, немодифицированных соединительно-тканных белков и фталоил- желатины. Результаты определения инфекционной активности вируса болезни Ауески, иммобилизованного в зависимости от соотношения компонентов, их концентрации и температурных режимов способа после инкубации в желудочном соке в течение 3-5 ч, представлены в табл. 1.

Из данных табл. 1 следует,1 что оп20

25

тимальной концентрацией вирусосодер- жащей жидкости (исходный продукт) является 0,5-10%-ная концентрация (эксперименты № 3-7), оптимальной концентрацией раствора соединительнотканных белков животных - 2-10/ (эксперименты № 0-12), оптимальной концентрацией раствора модифицированного полипептида (фталоилжелатины) - 1-10% (эксперименты № 13-17). Оптимальным соотношением компонентов (У:У:У) вирусосбдержащая жидкость: раствор соединительно-тканных белков :раствор фталоилжелатины является 1:0,1-5,0:0,1-5,0 (данные экспериментов № 18-27, табл. 1). Оптимальные температурные режимы способа 10-40 С (эксперименты № 28-31, табл. 1).

Пример 4. Выполняется по примеру 2, только на заключительном этапе получения препарата вместо вы« сушивания и измельчения смесь виру- сосодержащей жидкости, растворов

1637808.4

соединительно-тканных белков и фталоилжелатины охлаждают до образования геля, который затем измельчали и обрабатывали пылью дубильных веществ (таннином) и антиоксидантов (аскорбиновой кислотой).После инкубации полученного таким образом препарата в желудочном соке (рН 2,0) в течение 3-5 ч и далее обработкой в среде с рН 8,0 в течение 30 мин активность вируса болезни Ауески в культуре клеток составляла 6,5-7,0 lg

Пример 5. Исходный препарат интерферона получают путем индукции лейкоцитов селезенки (культивируемых в среде 193) вирусом болезни Ньюкаст- ла, штамм Н (10-100 ТДЛ 50/)(Леткч, ) и фитогемагглютинином (20 мкг/мл клеточной суспензии) в течение 20-24 ч. Затем культуральную жидкость центрифугируют (2-5 тыс. g, 30 мин), лиофи- лизируют и полученный сухой препарат растворяют до концентрации белка 0,1- 12%. Такой препарат интерферона конт- ролируют по его противовирусной активности в культуре клеток ПСП или СПЭВ против вируса визикулярного стомати-. та - ВВС (штамм Индиана, доза 100- 1000 ТЦДзд). При этом титром интерферона является то наименьшее разведение препарата, которое предотвращает цитопатическое действие ВВС. В работе использовали исходные препараты интерферона с титром 2«10.

В табл. 2 приведены данные по активности препарата интерферона, иммобилизованного согласно предлагаемого способа, с использованием немодифицированных белков соединительных тканей и модифицированного полипептида (фталоилжелатины) в зависимости от- параметров компонентов и температурных режимов способа иммобилизации, после обработки желудочным соком.свиней.

Данные, приведенные в табл. 2, Свидетельствуют о том, что наиболее оптимальными параметрами предлагаемого способа являются следующие: 0,5- 10%-ный раствор исходного продукта (в этом примере - интерферон) смеши- вают последовательно с 2-10%-ным раствором соединительно-тканных белков и 1-10%-ным раствором модифицированных природных белков (фталоилжелатины) при 10-40 С в соотношении V:V:V 1:0,1-5,0:0,1-5,0, после чего либо высушивают и измельчают, либо охлаж30

35

50

55

40

45

5163

дают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами.

Таким образом, как в примере с использованием в качестве исходного , продукта вируса вакцинного штамма ВУК-628 болезни Луески, так и в примере с препаратом интерферона показана высокая воспроизводитель- ность и эффективность предлагаемого способа.

Формула изобретения

Способ получения препарата для перорального введения, включающий смешивание раствора биологически активного вещества с раствором белков соединительных тканей животных, охлаждение до образования геля с

последующей обработкой дубильными ве-: ществами, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности препарата в желудочно-кишечном тракте, биологически активное вещество используют в концентрации 0,5- 10%, а белки соединительных тканей

животных в концентрации 2-10%, в полученную смесь при 10-40°С дополнительно пводят 1-10%-ный раствор лоилжелатины при следующих объемных соотношениях, мае.ч.:

Раствор биологичес- ки активного вещества1,0 Раствор белков соединительных тканей животных 0,1-5,0 1-10%-ный раствор

фталоилжелатикы0,1-5,0

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения препаратов для перорального введения. Целью изобретения является повышение стабильности препарата в желудочно-кишечном тракте. Поставленная цель достигается тем, что наря- / ду с немодифицированными природными полипептидами в качестве носителей используют модифицированные природные полипептиды, например флатоилже- латину. Способ осуществляют.путем смешивания 0,5-10%-ного раствора биологически активного вещества последовательно с 2-10%-ным раствором белков соединительных тканей животных и 1-10%-ным раствором фталоилжелатины при 10-40°С в объемном соотношении . 1,0:0,1-5,0:0,1-5,0, после чего смесь либо высушивают и измельчают, либо охлаждают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами. 2 табл. с S (Л

Таблица 1

Активность вируса болезни Ауески, иммобилизованного с использованием нативных и модифицированных природных полипептидов, в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов способа иммобилизации

Таблица 2

Активность препарата интерферона, иммобилизованного с использованием нативных и модифицированных полипептидов, в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов, после обработки желудочным соком свиней

П родолжение табл.1