Способ оценки проникновения веществ в клеточные суспензии Советский патент 1991 года по МПК G01N24/08 G01N33/483 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для определения количества проникших в клетки веществ

Цель повышение точности за счет одновременной оценки концентрации нескольких веществ

На и 2 показан спектр Н-ЯМР эритроцитов и надосадрчной жидкости соответственно

Способ осуществляют следующим образом

Эритроциты выделяют из свежей донорской крови человека, К 50 об«% эритроцитной массы добавляют 50 раствора следующего состава, м. Этиленгликодь (ЭГ) 5 Метанол (мет) 5 Диметилсульфоксид (ДМСО) 5 Натрийхлор (NaCl) 0,9 Н40 84,1 Приготовленные образцы суспензии эритроцитов помещают в ампулу сне к г- рометра ЯМР, туда же вкладывают капилляр с эталонным раствором. Состав эталонного раствора подбирают таким, чтобы при снятии спектра ЯМР эритроцитов на ядрах (Н и натрия иметь эталонные сигналы, не меняя капилляр в ампуле спектрометра.

Для приготовления эталонного раствора используют , в которой растворяют следующие вещества.

Натриевая соль 2,2 диметил 2 сила- пентан-5 сульфоновой кислоты (ДСС) 50 мМ, NaCl 200 мМ.

Суспензию эритроцитов в ампуле спектрометра ЯМР центрифугируют и

снимают спектры ЯМР эритроцитов .и надосадочной жидкости на ядрах Н и . Используют мультиядерный спектрометр Bruker CXP-300

Б качестве эталона в спектрах

Н-ЯМР служит ДСС. Используя спектры на фига 1 , находят интегральные интенсивности сигналов ЯМР, нормированные к интенсивности эталонного сигнала, для эритроцитов

снлэгля

Ь. || 0,842

{SCH,DCCW

5 снимет 46

b 55 o,807

г SCH,.nrf4 58

Ъвсе

58

B SXs. 2- i 017

Ь9 5СНзРсс

57

По спектрам на фиг,2 находят аналогичные величины в надрсадочной жидкости

3СНгэг52

b

тО, CH,DCC

41

Ьсн3мет 54 к 77 1.317

53снЭ1,сс 41

3СНзТ МСО 49 Ь, 1.195

6SCH,DCC 41

Отсюда находят коэффициенты перераспределения

о bi

ЗГU1 0Ј0U

ЭГ

,262

667

««- - Е - 1 - «

п- Ьз 1±017 R

чгмсо - bg 1,195 U Bbl

Дачее снимают спектры ЯМР эритроцитов и надосадочной жидкости на яд-

л д

pax Na, Эталоном здесь служит сиг

л ъ

нал Na в капилляре, смещенный относительно сигнала Na в ампуле за счет взаимодействия с диспрозием. Из полученных спектров находят

нормированные интегральные интенсивности сигналов 2 Na-ЯМР для эритро-

ЦД1ТОВ.

S Wa 9p 11 b 0,183

7s Na rr 60

и для надосадочной жидкости

SNa эр 152 Ьд -f 2,533

8sNa п 60

Далее находят коэффициент перераспределения

0 Ь2 ОИ83

ЧКа Ъ8 2,533 U U/

Таким образом, по коэффициентам перераспределения можно оценить концентрацию веществ внутри и вне клетки.

Формула изобретения

Способ оценки проникновения веществ в клеточные суспензии, включающий разделение исследуемой суспензии на клетки и внеклеточную жидкость и последующее определение в них концентрации исследуемых веществ, отличающийся тем, что, с це-

временной оценки концентрации нескольких веществ, разделение суспензии осуществляют в пробирке, в которой снимают спектры ЯМР клеток и внеклесивностей полученных сигначов ЯМР определяют концентрации исследуемых веществ.

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть исп оль зовано для определения количества проникших в клетки веществ Цель повышение точности за счет одновре - менной оценки концентрации нескольких веществ - достигается за счет измерения спектров ЯМР клеток и внеклеточной жидкости и последующего определения концентрации веществ по отношению интенсивностей сигналов ЯМР. 2 ил. фиг.1

эг