Способ моделирования инфекционного процесса после трансплантации Советский патент 1991 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и трансплантологии

Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.

Способ осуществляют следующим образом.

За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого стафилококка (штамм 489) суспендируют в 5 мл физиологического раствора, инкубируют при 37°С в течение 3 ч на шутеле.

Выбор штамма 489 условен, так как может быть использован и любой другой другой штамм с высокой степенью патогенности. Однако на протяжении всех этапов экспериметальных исследований необходимо использовать определенный штамм для чистоты эксперимента.

После инкубации центрифугируют в течение 10 мин при 7000 об/мин, затем на- досадочную жидкость сливают, осадок ре- суспендируют в 5 мл стерильного физиологического раствора и вновь центрифугируют

10 мин при 7000 об/мин для получения высокой концентрации. Степень мутности со1 ставляет 10П клеток (по стандарту мутности).

В пробирку с 5 мл данной культуры помещают синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см и инкубируют его в течение суток при 4°С (в холодильни-. ке). Диаметр трансплантата подбирают в соответствии с диаметром аорты экспериментального животного (0,6-1 см).

За 2-3 ч до операции п ротез перемещают в стерильную чашку Петри до полного высыхания при комнатной температуре.

Операцию проводят в условиях стерильной операционной под интубационным наркозом после премедикации дроперидолом и калипсолом, инъецированными внутримышечно в одном шприце за 30 мин до операции, для интубации используют 2%-ный раствор гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, который инъецируют внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под

О

го

Ч)

ч

контролем роговичного рефлекса. После интубации наркоз поддерживают внутривенным капельным введением фентанила по 2 г через 20-30 мин на физиологическом растворе (200 мл).

После обработки операционного поля иодом производят разрез по средней линии живота, вскрытие брюшной полости и обкладывание ее пеленками, выделяют брюшную аорту после рассечения париентальной брюшины, аорту пережимают на двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий и выше бифуркации аорты. После пересечения аорты производят ее протезирование синтетическим гофрированным протезом (длина 3 см. диаметр соответствует диамет- ру аорты), поскольку протез был заранее инфицирован патогенной культурой, производят отграничение свободной брюшной полости и забрюшинной клетчатки стерильными пеленками для предотвращения распространения бактериального агента. После окончания протезирования снимают дистальный, а затем проксимальный зажимы с аорты и восстанавливают кровоток. После тщательного гемостаза ушивают брюшину непрерывным кетгутовым швом. Рану передней брюшной стенки наглухо ушивают послойно шелковыми швами.

П р и м е р 1. Беспородная собака мужского пола весом 16 кг.

За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого стафилококка (штамм 489) суспендировали в 5 мл физиологического раствора, инкубировали при 37°С в течение 3 ч в шутеле. Затем центрифугировали в течение 10 мин при 7000 об/мин надосадочную жидкость сливали, осадок ре- суспендировали в 5 мл стерильного физиологического раствора и вновь центрифугировали 10 мин при 7000 об./мин, для получения высокой концентрации. Степень мутности в данном случае составила 106 клеток (по стандарту мутности).

В пробирку с 5 мл данной культуры помещали синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см и диаметром 1 см и инкубировали его в течение суток при 4°С {в холодильнике).

После инкубации протез перемещали в стерильную чашку Петри и после полного высыхания его через 2 ч начинали операцию.

Операцию проводили в условиях стерильной операционной под интубационным наркозом, за 30 мин до операции произвели премедикацию дроперидолом и калипсо- лом по 3 г, инъецированными внутримышечно в одном шприце. Для полного расслабления дыхательной мускулатуры в

момент интубации использовали 2%-ный раствор гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, которым инъецировали внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под контролем роговичного рефлекса. После интубации наркоз поддерживали внутривенным капельным введением фентанила по 2 г через 20-30 мин (в зависимости от рого- 0 вичного рефлекса) на 200 мл физиологического раствора.

После интубации и подключения инту- бационной трубки к аппарату искусственной вентиляции легких брили переднюю 5 брюшную стенку лежащего на спине и фиксированного за лапы животного. Операционное поле на всем протяжении передней брюшной стенки обрабатывали йодом, затем производили разрез по средней линии 0 живота на протяжении 25 см, вскрывали брюшную полость и обкладывали ее пеленками. После рассечения париентальной брюшины выделяли брюшную аорту (инф- раренальный отдел). Аорту пережимали на 5 двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий (на 0,5 см) и выше бифуркации аорты на 1 см, после пересечения аорты производили ее протезирование синтетическим гофрированным протезом длиной 3 см. за- 0 ранее инфицированным золотистым стафилококком со степенью 10 клеток. Диаметры аорты и протеза одинаковы - 1 см. До протезирования аорты и начала манипулирования а брюшной полости инфицированным 5 протезом обкладывали стерильными пеленками свободную брюшную полость и забрю- шинную клетчатку, отграничив их тем самым от возможного инфицирования во время операции. После окончания протезирова- 0 ния снимали дистальный, а затем проксимальный зажимы и восстанавливали кровоток. Время пережатия аорты составило 24 мин, кровопотеря - около 60 мл. После тщательного гемостаза протез реперитони- 5 зировали, ушив брюшину непрерывным кетгутовым швом. Рану передней брюшной стенки ушили послойно наглухо шелковыми швами. Пробуждение собаки от наркоза наступило через 1 ч 40 мин. 0 Достоверность инфицирования трансплантата в зоне протезирования аорты была подтверждена сцинтиграфией с 99М Тс-лей- коцитами через 2 ч после операции (после полного пробуждения животного). При 5 сцинтиграфии протез четко визуализировался на персистеноскопе гамма-камеры, что свидетельствовало о миграции в зону протезирования меченых лейкоцитов, а значит, наличии в этой зоне инфекции. Контрольная сцинтиграфия через 8 сут после

операции также подтвердила наличие инфекционного процесса в зоне протеза, так как инфицированный трансплантат четко визуализировался. Кроме того, полученные результаты подтверждены при аутопсии, проведенной на 11-е сутки после операции (в день смерти собаки). На аутопсии обнаружено около 900 мл крови в брюшной полости вследствие прорезывания двух швов проксимального анастомоза и аррозионно- го кровотечения, что безусловно явилось результатом развития в зоне реконструкции аорты инфекционного процесса. Кроме того, бактериологическое исследование резецированного во время аутопсии протеза идентифицировало рост патогенной культуре золотистого стафилококка (штамм 489), что свидетельствует о прогрессировании инфекционного процесса и достоверно подтверждает практическую значимость воспроизведенной модели инфицированного трансплантата.

П р и м е р 2. Беспородная собака женского пола массой 15,5 кг.

За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого стафилококка (штамм 489) суспендировали в 5 мл физиологического раствора, инкубировали при 37°С в течение 3 ч на шут еле. Затем центрифугировали в течение 10 мин при 7000 об/мин. На- досадочную жидкость сливалич осадок ресус- пендировали 5 мл стерильного раствора и вновь центрифугировали 10 мин при 7000 об./мин. для получения высокой концентрации. Степень мутности в данном случае составила 10 клеток (по стандарту мутности).

В пробирку сданной культурой помещали синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см, диаметром 0,9 см и инкубировали его в течение суток при 4°С (в холодильнике).

После инкубации протез перемещали в стерильную чашку Петри и после полного высыхания его через 3 ч начали операцию.

Операцию производили в стерильных условиях (как и во всех случаях) под интуба- ционным наркозом, за 30 мин до операции производили премедикацию дропередолом и калипсолом по 3 г, инъецированными внутримышечно в одном шприце. Для полного расслабления дыхательной мускулатуры в момент интубации использовали 2%-ный раствор гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, который инъецировали внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под контролем роговичного рефлекса. После интубации наркоз поддерживали внутривенным, капельным введением фентанила по 2 г через 20-30 мин (в зависимости от роговичного рефлекса) на 200 мл физиологического раствора.

Укладывали собаку на операционный 5 стол на спину и фиксировали к столу вытянутые лапы. Подключали к аппарату искусственнойвентиляциилегкихинтубационную трубку. Брили переднюю брюшную стенку, а затем обрабатывали

0 йодом ее на всем протяжении. После обработки операционного поля производили разрез по средней линии живота на протяжении 25 см, вскрывали брюшную полость и обкладывали ее пеленками. После рассе5 чения париетальной брюшины выделяли брюшную аорту (инфраренальный отдел). После выделения аорты обкладывали свободную брюшную полость, а также забрю- шинную область пеленками, отграничив от

0 попадания инфекции. Аорту пережимали на двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий (на 0,5 см) и выше бифуркации аорты на 1 см. После пересечения аорты производили ее протезирование синтетическим

5 гофрированным протезом длиной 3 см, диаметром 0,9 см (как и аорта), заранее инфиг цированным золотистым стафиликокком (штамм 489) со степенью 10 клеток, после окончания протезирования снимали дис0 тальный, а затем проксимальный зажимы и восстанавливали кровообращение. Время пережатия аорты составило 29 мин, крово- потеря - около 70 мл. После тщательного гемостаза протез реперитонизировали,

5 ушив брюшину непрерывным кетгутовым швом. Рану передней брюшной стенки ушили послойно наглухо шелковыми швами, пробуждение собаки от наркоза наступило через 1 ч 55 мин

0 Достоверность инфицирования трансплантата в зоне протезирования аорты была подтверждена сцинтиграфией с 99М Тс-лей- коцитами через 2,5 ч после операции (после полного пробуждения) При сцинтиграфии

5 протез четко визуализировался на перси- стеноскопе гаммы-камеры, что свидетельствовало о миграции в зону инфекции меченых лейкоцитов. Собака умерла на 7-е сутки после операции от аррозионного кро0 вотечения из зоны протезирования вследствие прорезывания 6 швов проксимального анастомоза, что было выявлено при аутопсии. В брюшной полости было около 1 л крови. Бактериологическое исследование

5 протеза идентифицировало рост культуры , золотистого стафилококка (штамм 489).(

Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистом

трансплантате на 30% по сравнению с про-тогенной культуры, отличающийся,

тотипом.тем, что, с целью повышения воспроизводиФормула изобретениямости способа, бактериальный агент вводят

Способ моделирования инфекционногонепосредственно в трансплантат в степени

процесса после трансплантации путем вве-5 10-10 клеток и через 2-3 ч трансплантирудения экспериментальному животному па-ют сосудистый трансплантат животному.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и трансплантологии. Цель - повышение воспроизводимости способа. Бактериальный агент вводят непосредственно в трансплантат в степени 10 -107 клеток и через 2-3 ч трансплантируют сосудистый трансплантат экспериментальному животному Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистом трансплантате 30% по сравнению с прототипом.