Способ выявления вирулентности эшерихий Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления вирулентности эшерихий.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Выделенные штаммы патогенных эшерихий различных серогрупп засевают секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с мясопептонным агаром (МПА) Для получения более четкого результата МПА осветляют путем фильтрации в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, последующего отстаивания и декантирования.

Посевы в чашках инкубируют в термостате при 37 ± 0,2°С в течение 16-20 ч, т.е. до получения четкого роста по штриху. На выросшие культуры осторожно, не касаясь штриха посева и поверхности питательной среды, вносят пипеткой 4-5 см3 раствора азурэозина по Романовскому, разведенного

1:10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и при наличии темно- синего ( или черного) окрашивания колоний культуру относят к вирулентной.

Колонии и штриховой рост невирулентных штаммов патогенных эшерихий остаются бесцветными или окрашенными лишь по краям в светло-зеленоватый или голубоватый оттенок.

Для учета степени выраженности виру- лентности используют следующую систему:

4+ - черное окрашивание (резко выраженная реакция);

3+ - темно-синее окрашивание (выраженная реакция);.

2+ - синее окрашивание (положительная реакция);

1+ - зеленовато-голубоватое окрашивание всего штриха или колонии (слабо выраженная реакция;

±- слабое окрашивание по краю штриха или колонии (сомнительная реакция);

со

с

о

4 00

ю VJ

00

- отсутствие окрашивания роста (отрицательная реакция).

Вирулентными штаммами считают лишь те, которые дают реакцию не менее чем на 2 плюса.

Данным способом изучена вирулентность 167 штаммов патогенных эшерихий, выделенных из различных источников. По- ложительйый результат выявлен в 26,9±3.2% культур.

В таблице приведены сравнительные данные по выявлению вирулентности эшерихий предлагаемым способом и тремя другими: Hly, CFA и ККП.

Как видно из приведенных данных, предлагаемый способ дал совпадающие ре- з|гльтаты со статистически несущественными различиями (t 0,8-1,8).

Совпадающие результаты предлагаемого метода с тремя другими достигают 46,7%, а при сравнении с шестью другими способами (культур клеток и др) - до 77,78%.

0

5

0

5

У 60 штаммов совпадение положительных результатов наблюдают по 3-4 способам, а в 18% - по 5-6. У остальных 22 % было совпадение по 2 способам или вообще не выявлено такового.

Преимущества предлагаемого способа заключаются в его экспрессности (3-5 мин), простоте, экономичности, четкости результатов, высокой чувствительности, воспроизводимости на простой питательной среде (МПА), доступной для любой бактериологической лаборатории.

Формула изобретения

Способ определения вирулентности эшерихий, включающий выращивание чистой культуры на плотной питательной среде, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, на выросшую культуру наносят стандартный раствор азу- рэозина по Романовскому в разведении 1:10 дистиллированной водой на 1-2 мин, затем краску удаляют и при наличии черного или темно-синего окрашивания колоний культуру относят к вирулентной.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления вирулентности эшерихий. Цель изобретения - повышение точности способа Выделенные штаммы патогенных эшерихий засевают секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с мясопептонным агаром, инкубируют в термостате при 37 ± 0,2°С в течение 16-20 ч. На выросшие культуры вносят пипеткой 4-5 см раствора азурэозина по Романовскому, дополнительно разведенного V10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и учитывают наличие темно-синего или черного окрашивания роста вирулентных штаммов. Способ дает совпадающие результаты со способами Н1у, CFA, ККП (соответственно гемолиз в среде с 5% эритроцитов, d-маннозорезистентная гемаглютмнзция, кератоконьюнктиваль- ная проба). 1 табл