Питательная среда для дифференциации энтеропатогенных эшерихий Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики эше- рихиозов.

Известна дифференциальная элективная среда Левина для выделения патогенных кишечных палочек: на 100 мл мясопептонного агара добавляют 2 мл, 0.5%-ного водного раствора мителенового синего, 1,5 мл 2%-ного водного раствора эозина (эозин натрий бактериологический), 2 г лактозы, 0,2 г двухосновного фосфата калия. Среда позволяет отличать по внешнему виду синие или черные колонии лакто- зопозитивных кишечных палочек от лактозонегативных, прозрачных, бесцветных колоний шигелл, сальмонелл и оранжевых колоний протея, обладает способностью задерживать рост грамположительных микробов 1 .

Другая дифференциальная селективная среда предложена Райтом 30 г лактозы, 20 г триптозы. 6 г дрожжевого экстракта, 1 г додецила сульфата натрия, 0,2 г фенол рота, 0,1 г анилина синего растворяют в 1 л дистиллированной воды и добавляют 12 г агара (Oxold N 1). Среда позволяет дифференцировать лактозонегативные колонии от лак- тозопозитивных, а также является селективной - ее состав стимулирует рост патогенных энтеробактерий и добавляет рост других сопутствующих микробов.

Однако известные дифференциальные среды не дают возможности дифференциVI

О

О)

о ю ел

ровать колонии кишечных палочек по саха- розному признаку и морфологической характеристике. Среда Райта трудоемка в приготовлении из-за сложности состава.

Наиболее близкой по достигаемому эф- фс-ту является дифференциальная среда Ас.:ль-Либермана: на 1 л мясопептонного агара добавляют 10 г сахарозы и 0,6 г конго рота. Среда обладав1 способностью дифференцировать разные виды кишечных палочек, в том числе и энтеропатогенные, по сахарозному признаку и морфологической характеристике, однако не обладает элек- тивностью 3.

Цель изобретения - повышение точности дифференциации эшерихий.

Среду готовят следующим образом.

В растопленный стерильный питательный агар добавляют навески сахарозы, фенол рота и анилина синего. Тщательно перемешивают до растворения ингредиентов. Среду разливают по 25 мл в стерильные чаши Петри и оставляют до застывания. Затем чашки со средой подсушивают в термостате при 43°С в течение 30 мин, после чего она готова для использования. Цвет готовой среды красный.

Пример. На 1л мясопептонного агара добавляют 5 г сахарозы, 0,2 г фенол рота, 0.1 г анилина синего. Тщательно размешивают, разливают в чашки Петри. Затем чашки со средой подсушивают в термостате. Среда готова для использования. Саха- розонегативные колонии энтеропатогенных эшерихий отличаются от сахарозопозитив- ных интенсивностью окраски: сахарозоне- гативные - розовые, сахарозоггозитивные - серовато-розовые. Элективность среды сохраняется.

П р и м е р 2. Готовят среду аналогично примеру 1, но в 1 л мясопептонного агара ВНСХ.ЯТ 10 г сахарозы, 0,25 г фенол рота, 0,15 г анилина синего. Интенсивность -окраски колоний более яркая: сахарозонегативные - розовые с красным центром, сахарозопози- тивные бледно-розовые с чертым центром. Отмечаются морфологические различия при росте колоний лактозонегативных, слабо- с заживающих сахарозу. Элективность среды сохраняется.

Пример 3. На 1л мясопентонного агара добавляют 7,5 г сахарозы, 0.225 г фенол рота и 0,125 г анилина синего. Среда красного цвета. Интенсивность окраски колоний, выросших на этой среде, более яркая, чем в примере 1: сахарозонегативные - розовые с красноватым центром,сахарозо- позитивные - бледно-розовые с серым или черным центром. Элективность среды сохраняется.

Приготовленные по примерам варианты среды позволяют дифференцировать выросшие колонии эшерихий по сахарозному признаку и, отчасти, по их морфологической

характеристике, а также обеспечивают элек- тизность среды - происходит задержка роста грамположительных микробов.

Среду используют следующим образом. Готовят суточные агаровые культуры

лактозоотрицательных штаммов (шигелл. сальмонелл, стафилококка, протея), лакто- зо-сахарозоположительных штаммов (ЭПКП 018 ас, 0142) лактозоположительных, но сахарозонегативных (ЭПКП 044. 04).

штаммов, слабо сбраживающих сахарозу (ЭПКП 0111, 026). С помощью оптического стандарта мутности готовят взвеси монокультур, их высевают по 0,1 мл из разведения 10 , на чашки с предлагаемыми и

известными средами (Левина, Райта, Асель- Либермана). Высеьают также различные варианты смесей этих культур.

Учет результатов проводят через 18-20 ч инкубации посевов при 37°С.

Чувствительность, стабильность исходных биологических свойств, скорость роста испытуемых штаммов на опытной и известных средах одного порядка.

Дифференцирующие свойства: при посеве смеси ЭПКП 018 ас (сахарозо-лактозо- позитивные), ЭПКП 044 (сахарозонегативные, лактозопозитивные), шигелл (лактозо-саха- розонегативные) и ЭПКП 0111 (лактозопозитивные, но слабо сбраживающие сахарозу) на

опытной среде отмечается четкая дифференциация всех четырех видов энтеробактерий. Колонии имеют разнообразное окрашивание: розовато-серые с темным центром, розовые с красным центром, оранжево-розовые и красные. На известных средах-аналогах (Левина и Райта) отмечаются только два вида колоний на основе лактозного признака. Среда Асель-Либермана обладает такими же дифференцирующими свойствами, как и предлагаемая, но не обладает элективностью.

При количественном посеве миллиардной взвеси суточных агаровых культур эшерихий, протея и сальмонелл на предлагаемую среду и среды Левина и

Асель-Либермана количество колониеобра- зующих единиц для каждого отдельно взятого штамма было высоким и. практически одинаковым - 1,4х108,4.6хЮ8.2.2хЮ8 соответственно. Среда Райта, хотя и была чувствительна к эшерихиям и сальмонеллам (1,2хЮ8 колониеобразующих единиц), но оказывает ингибирующее действие на рост протея и стафилококка - 1,2хЮ5 и 1,4x10 соответствен но.

51703695 6

Предлагаемая среда и среда Левинасахарозу, отличающаяся тем. что. с

оказывают ингибирующее действие толькоцелью повышения точности дифференциана рост стафилококка - 2,3x10.ции эшерихий, она в качестве красителя соСреда Асель-Либермана не обладаетдержит фенол рот и анилин синий при

элективностью.15 следующем соотношении компонентов, г/л:

Формула изобретенияСахароза 5,0-10.0

Питательная среда для дифференциа-Фенол рот 0,2-0.25

ции энтеропатогенных эшерихий. содержа-Анилин синий 0.1-0,15

щая мясопептонный агар, краситель иМясопептонный агар 1л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики эшв- рихиозов. Цель изобретения - повышение точности дифференциации эшерихий. На 1 л мясопептонного агара добавляют 5-10 г сахарозы, 0,2-0.25 г фенол рота. 0.1-0,15 г анилина синего. Цвет готовой среды красный. Сахарозонегативные колонии энтеро- патогенных эшерихий розового цвете, сахарозопозитивные - серовато-розовые, среда элективная, оказывает ингибирую щее действие на рост стафилококка. у Ё