Способ выявления антителообразующих клеток на гистологическом препарате Советский патент 1991 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью является получение четкого свечения антителообразующих клеток за счет ингибирования неспецифического свечения окружающего фона.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят мазки-отпечатки или криос- татные срезы нефиксированной ткани. Далее после 10 мин высушивания на воздухе мазки фиксируют в охлажденном абсолютном ацетоне в течение 10 мин. Обработку специфическими сыворотками проводят через 24 ч. Препарат ополаскивают в физрастворе, приготовленном на 0,05 М фосфатном буфере (рН 7,0 - 7,4). Сыворотку наслаивают на препарат и инкубируют с ней во влажной камере при комнат

ной (20 - 25°С) температуре 30 - 40 мин„ Затем препарат отмывают в трех порциях физраствора по 10 мин и помещают в инкубационную среду для выявления миелопероксидазы на 5 мин при комнатной температуре. Инкубационную среду готовят непосредственно перед употреблением.

Инкубационная среда содержит солянокислый бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия и перекись водорода.

Сначала 0,4 - 0,6 мг солянокислого бензидина растворяют в 20-21 мл 96 этилового спирта. Затем 2 - 3 мг нитропруссида натрия разводят в 5 - 10 MI воды. Эти растворы смешивают, К полученному составу добавляют воду I. 1 каплю (1 - 1,5мл) 30%-ной перекиси водорода „

61

Препараты в инкубационной среде выдерживают в течение 5 мин при комнатной температуре. После их ополаскивают в физиологическом растворе и заключают в глицерин При просмотре используют фильтры СЗС-24-4; СЗС-21- 2 и СС-15-4

Пример 1. Больной, 23 года, огнестрельное ранение сердца. Нмму- нолюмисцентному исследованию на наличие антителопродуцирующих клеток была подвергнута селезенка. Кри- остатные срезы нефиксированной ткани селезенки после высушивания, фиксации в абсолютном ацетоне, ополаскивании в физрастворе, далее обрабатывали люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человекао При просмотре отмытых препаратов селезенки в люминесцентном микроскопе в красной пульпе обьаружено большое количество ярко светящихся клеток Для исключения люминесценции зернистых лейкоцитов эти же препараты инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре в инкубационной среде на миелопероксидазу. При повторном просмотре этих препаратов в люминесцентном микроскопе обнаружены лишь единичные светящиеся плазматические кпетки в красной пульпе, что дало возможность выявить наличия антителообразующих клеток в селезенке.

П р и м е р 2. Ребенок 6 мес. Па- тологоанатомический диагноз: острый диффузный миокардит, серозно-гнойная пневмония„ Приготовлены криостатные срезы бифуркационного лимфоузла, которые обработаны люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человека

0

5

0

0

5

0

Обнаружено умеренное количество светящихся клеток в мозговых тяжах и большое количество светящихся клеток в синусах Для исключения люминесценции зернистых лейкоцитов эти, же срезы обработаны на миелопероксидазу и вновь просмотрены в люминесцентном микроскопе. Свечение клеток в мозговых тяжах сохранилось, а в синусах исчезло В клетках синусов выявлена высокая активность миело- пероксидазы, что указывает на принадлежность их к антителообразующим клеткамо

Способ позволяет более полно выявить антителообразующие клетки. Окраска дополнительно в среде, содержащей бензидин, снимает полностью неспецифическое свечение фона. Формула изобретения

Способ выявления антителообразующих клеток на гистологическом препарате путем его обработки специфической люминесцирующей сывороткой с лоследующей микроскопией, отличающийся тем, что, с целью получения четкого свечения клеток за счет ингибирования свечения окружающего фона, обработку сывороткой проводят в течение 30-40 мин при температуре 20-25°С, далее препарат дополнительно инкубируют в среде, содержащей бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия и перекись водорода при следующих соотношениях компонентов,

Бензидин0,4 - 0,6 Этиловый спирт20-21 Нитропруссид натрия2-3 30%-ная перекись водорода1-1,5 ВодаОстальное

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологиио Цель - получение четкого контраста клеток за счет ингибирования неспецифического сведения фона. Для этого обработку в специфической сыворотке проводят в течение 30-40 мин при 20 - 25°С. Далее препараты дополнительно инкубируют в среде, содержащей бензи- дин, этиловый спирт, нитропруссид натрия, перекись водорода и воду Среда выявляет наличие миелоперокси- дазы в клетке. Данная обработка полностью снимает свечение фона, что позволяет точно определить наличие и содержание антителообразующих клеток на препарате. §

Составитель Л.Стеблева Редактор Т.Лазорекко Техред с.Мигунова

Заказ 1516

Тираж 397

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Корректор ЛоПатай

Подписное