Способ культивирования грибов рода FUSаRIUм Советский патент 1991 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к способу культивирования поверхностным методом на жидких питательных средах грибов рода Fusarium.

Целью изобретения является повышение выхода биомассы и токсинов гриба.

Способ осуществляют следующим образом.

На стерильный агар Чапека вносят взвесь конидий грибов Fusarium culmorum или Fusarium nivale, смытую стерильной водой с культуры грибов в пробирках на скошенном агаре Чапека. Сразу же вслед за этим на поверхности инокулированного таким образом агара размещают простерили- зованный сухой нетонущий материал (кусочки пенопласта размером 1x1, соломка длиной 3-5 см или просушенное зерно, пробка, дерево), в количестве 5-8 шт. на чашку Петри. Культивирование грибов осуществляют в термостате при 25°С в течение 5-7 дней. Готовят стерильную жидкую питательную среду, содержащую, г/л; сахароза 30; КН2Р04 1; Мд504-7Н20 0,5; KCI 05; FeSO 7Н2ОО,01; NH4NOa2; отвар злаковых растений - до 1 л, инокулируют ее приел

готовленным посевным материалом на нетонущем материале.

Культивирование грибов осуществляют поверхностным методом в литровых колбах, содержащих 200 мл указанной питательной среды при 25°С в течение 15-20 дней в термостате.

Максимальный выход биомассы и токсинов наблюдается к 15-20 дню культивирования.

Пример 1. В чашки Петри на стерильный агар Чапека, предварительно инокули- рованный спорами гриба F.culmorum и F.nlvale, размещают кусочки пенопласта по 5 шт. на 1 чашку Петри. Одновременно в стерильные чашки Петри вносят простери- лизованное увлажненное зерно ячменя и инокулируют его взвесью конидий гриба в 1 мл физраствора.

Чашки Петри с подготовленным субстратом в обоих случаях помещают в термостат при 25°С на 7 дней для культивирования грибов. За это время на увлажненном зерне образовался налет мицелия, а нетонущий материал также оброс мицелием.

Увлажненное зерно с образовавшимся на нем мицелием и заспоренный грибом нетонущий материал вносят в колбы с 200 мл жидкой питательной среды следующего состава, г/л: сахароза 30; КНаРОз 1; MgS04 7Н20 0,5; KCI 0,5; FeSCM THaO 0,01; КМОз 2; дистиллированная вода -до 1 л, и культивируют в термостате при 25°С в течение 15 дней (по 5 колб на вариант}. В случае инокуляции жидкой питательной среды культурой гриба на увлажненном зерне наблюдается погружение инокулюма на дно колбы. Наблюдения в течение всего срока культивирования показали, что гриб ни на поверхности, ни в глубине питательной среды не развивается, а культуральный фильтрат (КФ) не обладает выраженной фи- тотоксичностью.

В колбах, инокулированных заспорен- ным грибом нетонущим материалом, развитие гриба на поверхности среды отмечено на третий день, а к седьмому дню культивирования мицелий гриба активно развивался и достигал своего максимума к пятнадцатому дню так же, как и уровень токсичности кудьтурального фильтрата.

Данные по развитию гриба и уровню токсичности культурального фильтрата приведены в табл. 1.

Пример 2. Инокуляцию и культивирование гриба проводят в условиях, аналогичных примеру 1, но в жидкую питательную среду вместо КМОз вводят МНдМОз в количестве 2 г/л.

Результаты приведены в табл. 2.

П р и м е р 3. Инокуляцию и культивирование гриба проводят аналогично примеру 1, но в качестве основы среды используют отвар ячменя,

Результаты приведены в табл. 3.

Пример 4. Инокуляцию и культивирование гриба проводят в условиях, аналогичных примеру 1, но вместо КМОз в жидкую питательную среду вводят , а в качестве основы среды используют отвар ячменя.

Результаты представлены в табл. 4. Таким образом, использование для культивирования грибов рода Fusarium нетонущего заспоренного материала для

удержания образуемой в процессе культивирования грибной биомассы на поверхности среды и применение модифицированных жидких питательных сред уско- ряют процесс развития, накопления

биомассы гриба и усиливают фитотоксиче- ские свойства культурального фильтрата.

Формула изобретения

Способ культивирования грибов рода Fusarium, предусматривающий приготовление посевного материала на твердой питательной среде, приготовление жидкой питательной среды, содержащей, г/л: сахароза 30; фосфорнокислый однозамещенный калий 1; магний 0,5; хлористый калий 0,5; FeS04 7НгО 0,01; соль азотной кислоты и основу среды, засев жидкой среды посевным материалом и дальнейшее культивирование грибов, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы и токсинов гриба, на поверхности твердой питательной среды размещают сухой нетонущий материал, из солей азотной кислоты используют азотнокислый аммоний, а в качестве жидкой основы срзды используют отвар злаковых растений.

Таблица I.

Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarlum на 15-й день культивирования

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к способу культивирования поверхностным методом на жидких питательных средах грибов рода Fusarium. Целью изобретения является повышение выхода биомассы и токсинов гриба. Способ культивирования грибов рода Fusarium осуществляется следующим образом. На стерильный агар Чапека вносят взвесь конидий гриба F.culmorum и F.nivale, затем на поверхности инокулиро- ванного агара размещают простерилиэо- ванный нетонущий сухой материал в качестве которого могут быть использованы кусочки пенопласта размером х 1 см. соломка длиной 3-5 см, просушенное зерно, пробка, дерево в количестве 5-8 шт. на чашку Петри. Культивируют гриб три 25°С в течение 5-7 дней. Полученный заспоренный нетонущий материал вносят в жидкую питательную среду, содержащую, г/л: сахароза 30; КН2Р04 1; MgSO r7H20 0,5; KCI 0,5; FeS04 -7Н20 0.01; NH4NOa 2; отвар злаковых растений - до 1 л, культивируют при 25°С в течение 15-20 дней. Способ позволяет получить 125-150 г влажной грибницы и увеличить фитотоксичность фильтрата культуральной жидкости. 4 табл.

Таблица 2

Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования

Таблица 3

Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования

Таблица 4

Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования