Способ моделирования холерной инфекции Советский патент 1991 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной микробиологии и может быть применено при моделировании кишечных инфекций.

Цель изобретения - приближение к клиническому течению за счет удлинения процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Взрослым мышам весом 16-18 г (линии ВАШ/с и беспородным) обоего пола, изолированным друг от друга и лишенным пищи на сутки, проводят ощелачивание желудка и

тонкого кишечника раствором пищевой соды.

Непосредственно перед заражением в ректальный канал вводят ватный тампон на глубину до 5 мм и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняют медицинским клеем.

Взвесь вибрионов вводят внутрижелудочно с помощью зонда в 3-4% содовом растворе в объеме 0.5 мл. как указыпялось выше. Заражающая доза варьировала от 10 до 106 живых клеток Был иополыовян штамм холерного вибриона V eltoi гтЯ71

о

vj

fe -1

За животными наблюдали 72 ч, по истечении которых оставшихся в живых мышей забивают.

Всех павших и забитых животных вскрывают. Критерием развития специфи- ческого инфекционного процесса были: количество павших животных и сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогенного эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее ха- рактеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника).

Способ подтверждается следующим примером.

Пример 1. Мышь весом 18 г линии ВАШ/с изолируют в клетке, конструкция которой исключает возможность копрофа- гии, и на сутки лишают пищи, но не воды. За 5 ч до заражения животному внутрижелу- дочно с помощью металлического зонда с напаянным наконечником из олова размером 1,5-2 мм (для предупреждения механического травмирования), соединенного с дозированным шприцем, ввели 0,5 мл 3%- ного раствора бикарбоната натрия. Повтор- ное и аналогичное введение содового раствора производят за 1 ч до заражения. Иепоредственно перед заражением животному в анальное отверстие на глубину 5 мм вводят плотный ватный тампон диаметром 2-3 мм. Пространство между тампоном и анальным отверстием заполняют дозиро- вянно (0,1-0,2 мл) медицинским клеем с помощью шприца или резиновой груши, соединенных с пластмассовым наконечни- ком.

Культуру вирулентного штамма холерных вибрионов (eltor, 5879) готовили по методике: 18-часовую культуру, выращенную при 20-22°С, отсевали в пробирку с 1 % пеп- тонной водой и через 4 ч инкубации при 37°С высевают на влажную пластинку щелочного агара. Посевы выдерживают при комнатной температуре 18 ч. Из выросшей культуры петлей готовят взвесь в 3%-ном раствор - пищевой соды (Ыа2СОз) и доводи ли до концентрации 4-10 по стандарту мутности ОСО 20 ед, а затем последовательно десятикратными разведениями в указанном содовом растворе доводят до концентрации 4 106, 4-Ю5, 4-Ю4, 4-10 и 4 102 м.к./мл. Из каждого указанного разведения берут для заражения 0,25 мл взвеси, в которых соответственно содержалось 106, 10Г), Ю 1, 103и Ю2 м.к./мл. Из последней пробирки (4-10 ) делают высев по 0,1 мл на две чашки со щелочным агаром для определения количества жизнеспособных клеток.

Для заражения использовали свежеприготовленные взвеси.

Заражение проводят внутрижелудочно по описанной методике. В течение последующих часов наблюдения животное не получало пищи, но не было лишено воды. Мышь пала на третьи сутки после заражения при явлениях гипотермии, гиподинамии, усиленном диурезе, судорогах. При вскрытии подкожная клетчатка сухая, тусклая, кишечник вздут, растянут, заполнен серозной прозрачной жидкостью. Коэффициент накопления жидкости определяют по формуле:

к -- 1000 ; К 1,8

В -А 1.8 г -1.8 -1000 111,

где А - вес тонкого кишечника с накопившейся жидкостью в граммах:

В - вес тела животного.

Значение коэффициента 111 подтвердило специфичность развившееся инфекционногопроцесса.При бактериологическом исследовании содержимого тонкого кишечника количество живых клеток вибриона достигало 2-Ю5, что свидетельствовало об интенсивном размножении возбудителя. Приведенные данные подтверждали специфичность развившегося инфекционною процесса.

Таким образом, приведенные примеры показывают, что авторами впервые создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции на доступных и удобных лабораторных жи- мотных - взрослых мышах. Положительный эффект достигался принципиально новой методикой опечатывания: в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Это позволило стабильно сохранять состояние опечатывания в течение 72 ч. Тем самым обеспечивался необходимый контакт вибрионов со слизистой кишечника как важное условие развития инфекции.

Высокая чувствительност модели по- зроляет использовать ее для определения наличия и степени вирулентности холерных вибрионов.

Сравнительно длительный срок наблюдения за животными делал модель пригодной для изучения инфекционного процесса в динамике.

Формула изобретения Способ моделирования холерной инфекции, включающий предварительную обработку желудочно-кишечного тракта и обтурацию анального отверстия экспериментального животного отличающийся тем. что, с целью приближения к клиническому течению за счет удлинения процесса.

предварительную обработку желудочно-ки-по 0,5 мл, тампонируют и обтурируют пряшечного тракта осуществляют путем внут-мую кишку с последующим внутрижелудочрижелудочного введения 3-4%-ногоным введением холерного вибриона в дозе

содового раствора за 5 и 1 ч до заражения102-106 живых клеток.

Изобретение относится к экспериментальной микробиологии и может быть применено при моделировании кишечных инфекций. Цель изобретения - приближение к клиническому течению за счет удлинения процесса. Предложенный способ моделирования заключается в том, что взрослым линейным и беспородным мышам проводили предварительную обработку желудочно-кишечного тракта путем внутрижелудочного введения (по 0,5 мл на каждое введение) 3 - 4%-ного содового раствора NA₂CO₃ за 5 ч и 1 ч до заражения. Непосредственно перед заражением в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Холерные вибрионы вводили внутрижелудочно в дозе 10² - 10⁶ в 0,25 мл 3 - 4%-ного содового раствора. За животными наблюдали в течение 3 сут. Критериями оценки развития инфекции служили количество павших животных, сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогенного эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее характеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника). Авторами впервые была создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции. Способ прост в исполнении, не требует специальной подготовки.